高級生物化學實驗

內(nèi)容概要

《高級生物化學實驗》是南京大學生命科學實驗教學示范中心組織編寫的《現(xiàn)代生命科學實驗系列叢書》的一個分冊。內(nèi)容建立在學生已掌握了一定的生物化學基本實驗技能的基礎(chǔ)上，精選了多個綜合性和創(chuàng)新性實驗，旨在強化提高學生的綜合運用能力和創(chuàng)新能力，讓學生在實驗課程中體驗科研的過程，使學生從整體上了解生命科學研究的思路和方法，培養(yǎng)學生正確的科研思維能力和綜合素質(zhì)。其中的創(chuàng)新性實驗既包含在新的條件下再現(xiàn)大科學家經(jīng)典實驗的項目，又有與生活實際相聯(lián)系的實驗項目。
本教材可作為高等院校生命科學、醫(yī)藥衛(wèi)生相關(guān)專業(yè)創(chuàng)新性實驗教材，也可供有關(guān)教師和科研人員參考使用。

作者簡介

無

書籍目錄

叢書序
叢書前言
實驗1 茶葉中黃酮含量的測定及其抗氧化活性的比較
實驗2 不同來源的角蛋白中胱氨酸的提取和測定
實驗3 多糖的分離純化、分子修飾及生物活性的研究
實驗4 蘆薈多糖的提取及其抗氧化性的研究
實驗5 油炸方便面中丙二醛含量的測定
實驗6 魚油中不飽和脂肪酸的提取、純化和測定
實驗7 淀粉的分離純化及組分(直鏈、支鏈)的含量測定
實驗8 十綠體偶聯(lián)因子(CF1)提取及ATP酶活性測定
實驗9 大蒜細胞SOD的提取分離及活力測定
實驗10 蛋白質(zhì)等電點測定——沉淀法和等電聚焦法的對比
實驗11 茶葉中多種成分的鑒定
實驗12 熒光蛋白質(zhì)——螺旋藻藻藍蛋白的提取和鑒定
實驗13 一種未知二肽的序列分析
實驗14 使用凝膠過濾層析研究蛋白質(zhì)與配體之間的相互作用
實驗15 Anfinsen實驗的重復和改進
參考文獻

章節(jié)摘錄

版權(quán)頁：   插圖：   將上清液轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中，真空濃縮至15 mL左右。在濃縮液中加入60 mL氯仿—正丁醇（4：1，V／V）混合液，充分振蕩20 min，靜置分層，3500 r／min離心15 min，將中間液面白色類似凝膠的蛋白質(zhì)和下層的有機溶劑除去。上層水相中繼續(xù)加入60 mL氯仿一正丁醇（4：1，V／V）混合液，充分振蕩20 min，靜置分層，3500 r／min離心15 min，取上層水相，如此重復直至離心后水相和有機相之間無蛋白質(zhì)層出現(xiàn)（約4～5次）。 將上層水溶液置透析袋中，用20倍體積的蒸餾水透析3 d，中間換水6次。將透析袋中溶液真空濃縮至15 mL左右。向濃縮液中加入4倍體積的無水乙醇，4℃冰箱放置12 h，4000 r／min離心20 min，收集沉淀。 將沉淀用少量蒸餾水溶解，冷凍干燥即得粗多糖，按下面的公式計算粗多糖的得率： 粗多糖得率（％）=[粗多糖的質(zhì)量（g）／山藥粉的質(zhì)量（g）]×100％ 2.粗多糖（RDP）的純化 取山藥粗多糖1 g，用DEAE—纖維素柱純化，水洗脫，苯酚一硫酸法檢測，收集多糖主峰，用無水乙醇沉淀，4000 r／min離心20 min，沉淀用少量蒸餾水溶解，冷凍干燥。 將凍干后的樣品用少量蒸餾水溶解，經(jīng)Sephadex G100凝膠色譜柱進一步純化，雙蒸餾水洗脫，收集多糖峰（兩個）。用乙醇沉淀，再冷凍干燥得純山藥多糖RDP—Ⅰ和RDP—Ⅱ。 3.純度及分子質(zhì)量測定 將純化后的山藥多糖RDP—Ⅰ、RDP—Ⅱ及Dextran標準品（分子質(zhì)量依次為57 200 Da、43 000 Da、21 400 Da、17 500 Da、50 Da）分別經(jīng)HPLC分離，洗脫劑為雙蒸餾水，流速為1 mL／min，收集洗脫峰，記錄洗脫時間和體積。根據(jù)洗脫峰的形狀判斷樣品的純度，以Dextran系列標準品的分子質(zhì)量對數(shù)與對應(yīng)的洗脫體積作標準曲線，再根據(jù)RDP—Ⅰ和RDP—Ⅱ的洗脫體積求得其分子質(zhì)量。 4.多糖的結(jié)構(gòu)分析 1）多糖的酸水解 稱取10 mg山藥多糖RDP—Ⅰ，加入2 mol／L三氟乙酸2 mL，封管后在120℃水解2 h，冷卻后減壓蒸去TFA。用紙色譜法檢測水解產(chǎn)物，展開劑為乙酸乙酯—吡啶—乙酸—水（5：5：1：3），用苯胺一鄰苯二甲酸試劑顯色。剩余水解物減壓干燥過夜后加入鹽酸羥胺10 mg及無水吡啶1 mL溶解，在90℃反應(yīng)30 min，冷至室溫，加入無水乙酸酐1 mL，在90℃下繼續(xù)反應(yīng)30 min，冷至室溫，加入H2O 1 mL搖勻。

編輯推薦

《高級生物化學實驗》可作為高等院校生命科學、醫(yī)藥衛(wèi)生相關(guān)專業(yè)創(chuàng)新性實驗教材，也可供有關(guān)教師和科研人員參考使用。

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