臨床基礎(chǔ)檢驗學(xué)實驗指導(dǎo)

內(nèi)容概要

《臨床基礎(chǔ)檢驗學(xué)實驗指導(dǎo)》是全國高等院校醫(yī)學(xué)檢驗專業(yè)實驗教學(xué)系列規(guī)劃教材之一，全書分八章共52個實驗和2個附錄。第一章為臨床檢驗基本技術(shù)，介紹實驗常規(guī)器材的使用和基本技術(shù)訓(xùn)練；第二章至第六章為臨床檢驗學(xué)基本實驗技術(shù)及驗證性實驗，按照標準化、規(guī)范化操作規(guī)程要求，介紹血液、尿液、糞便、生殖系統(tǒng)分泌物、其他體液的常規(guī)檢驗技術(shù)，更加注重檢驗技術(shù)與臨床實際操作的緊密結(jié)合，特別有助于學(xué)生把臨床檢驗與診斷相結(jié)合，對學(xué)生掌握本學(xué)科的基本知識、基本技能和今后的臨床工作具有參考價值。第七章臨床檢驗技能綜合訓(xùn)練及第八章研究應(yīng)用性實驗從綜合性、設(shè)計性、應(yīng)用性等多角度出發(fā)，介紹了具有重要臨床應(yīng)用價值的基本技術(shù)和實驗，尤其是對血細胞分析儀的校準、性能評價、檢測結(jié)果比對、室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評等的闡述，著重強調(diào)了臨床實驗室質(zhì)量管理，提高檢測結(jié)果的科學(xué)性、準確性和可比性，旨在提高學(xué)生對本學(xué)科理論和實踐的綜合運用能力，還可培養(yǎng)學(xué)生科研設(shè)計能力、實驗技能、綜合實驗?zāi)芰?，為今后的臨床工作打下理論和實踐的基礎(chǔ)。附錄介紹了臨床檢驗項目SOP編寫要求和醫(yī)學(xué)實驗室醫(yī)療廢物處理及要求，強調(diào)了實驗室整體管理，增加了《臨床基礎(chǔ)檢驗學(xué)實驗指導(dǎo)》實用性。
《臨床基礎(chǔ)檢驗學(xué)實驗指導(dǎo)》可供高等院校醫(yī)學(xué)檢驗專業(yè)、衛(wèi)生檢驗專業(yè)學(xué)生實驗使用，也可供從事臨床檢驗工作和醫(yī)學(xué)研究的技術(shù)人員參考使用，并可用作臨床醫(yī)學(xué)、醫(yī)學(xué)影像學(xué)、麻醉學(xué)、法醫(yī)學(xué)、預(yù)防醫(yī)學(xué)以及藥學(xué)專業(yè)實驗教學(xué)的參考用書。

作者簡介

夏曙華、莫非、鐘春琍、王正蓉

書籍目錄

序前言第一篇 臨床基礎(chǔ)檢驗學(xué)實驗技術(shù)及驗證性實驗第一章 臨床檢驗基本技術(shù)實驗一 光學(xué)顯微鏡的使用實驗二 微量吸管的使用實驗三 改良Neubauer計數(shù)盤的使用實驗四 血涂片制備與染色實驗五 血液標本采集第二章 血液一般檢驗實驗一 白細胞計數(shù)實驗二 白細胞分類計數(shù)實驗三 外周血白細胞形態(tài)學(xué)檢查實驗四 嗜酸粒細胞計數(shù)實驗五 血小板計數(shù)實驗六 紅細胞計數(shù)實驗七 血紅蛋白測定(氰化高鐵血紅蛋白測定法)實驗八 紅細胞形態(tài)學(xué)檢查實驗九 紅細胞比容測定實驗十 網(wǎng)織紅細胞計數(shù)實驗十一 紅細胞沉降率測定實驗十二 血細胞分析儀的使用第三章 尿液檢驗實驗一 尿液一般檢查實驗二 尿滲透量測定實驗三 尿液蛋白質(zhì)定性實驗實驗四 尿液葡萄糖班氏定性實驗實驗五 尿液酮體定性測定實驗六 尿液膽紅素定性測定(Harrison法)實驗七 尿膽原定性測定(改良Ehrlich法)實驗八 尿液本周蛋白定性檢查實驗九 乳糜尿定性檢查實驗十 尿液人絨毛膜促性腺激素定性檢查實驗十一 尿液的有形成分檢查實驗十二 尿液有形成分的定量計數(shù)實驗十三 尿液自動化分析儀檢驗第四章 糞便檢驗實驗一 糞便常規(guī)檢查實驗二 糞便分析工作站實驗三 糞便隱血試驗第五章 生殖系統(tǒng)分泌物檢查實驗一 精液檢驗實驗二 前列腺液檢查實驗三 陰道分泌物檢驗第六章 其他體液實驗一 腦脊液常規(guī)檢驗實驗二 漿膜腔積液常規(guī)檢驗實驗三 關(guān)節(jié)腔積液檢驗實驗四 痰液檢查實驗五 胃液與十二指腸引流液檢驗實驗六 羊水檢查第二篇 臨床基礎(chǔ)檢驗學(xué)綜合性實驗及研究應(yīng)用性實驗第七章 臨床檢驗技能綜合訓(xùn)練實驗一 血常規(guī)檢查與臨床檢驗基本技術(shù)綜合性實驗實驗二 紅細胞平均指數(shù)測定與臨床檢驗基本技術(shù)綜合性實驗實驗三 尿液常規(guī)檢驗與臨床檢驗基本技術(shù)綜合性實驗實驗四 血細胞分析儀的校準實驗五 血細胞分析儀的性能評價實驗六 血細胞分析儀檢測結(jié)果的比對實驗七 臨床血液常規(guī)檢驗室內(nèi)質(zhì)控實驗八 臨床血液常規(guī)檢驗室間質(zhì)量評價第八章 綜合性、設(shè)計性、應(yīng)用性的“三性”跨學(xué)科實驗設(shè)計實驗一 傳染性單核細胞增多癥的實驗室診斷實驗二 系統(tǒng)性紅斑狼瘡腎損害的實驗室診斷參考文獻附錄附錄一 臨床檢驗項目SOP編寫要求附錄二 醫(yī)學(xué)實驗室醫(yī)療廢物處理及要求彩圖

章節(jié)摘錄

第一篇  臨床基礎(chǔ)檢驗學(xué)實驗技術(shù)及驗證性實驗第一章  臨床檢驗基本技術(shù)實驗一  光學(xué)顯微鏡的使用【實驗?zāi)康摹?   1.掌握光學(xué)顯微鏡的正確使用和維護方法。2.熟悉光學(xué)顯微鏡的結(jié)構(gòu)和原理?！緦嶒炘怼抗鈱W(xué)顯微鏡是由物鏡和目鏡兩組會聚透鏡組成的光學(xué)折射成像系統(tǒng)。置于物鏡前方的被觀察物被作第一級放大成一倒立實像，該實像再被目鏡作第二級放大成一虛像，位于人眼的明視野處?！緦嶒炂鞑摹?.器材  光學(xué)顯微鏡、擦鏡紙。2.試劑  香柏油、清潔液（乙醚與無水乙醇3∶7）。3.標本  瑞氏染色血涂片。【實驗步驟】1.實驗準備（1）右手握鏡臂，左手托鏡座，平貼胸前，將顯微鏡從鏡箱內(nèi)取出后置于平穩(wěn)的實驗臺上，熟悉顯微鏡的結(jié)構(gòu)。（2）打開電源開關(guān)，旋轉(zhuǎn)粗準焦螺旋，將載物臺降至最低，旋轉(zhuǎn)光調(diào)節(jié)旋鈕，調(diào)整聚光器高度和光柵大小，使光強度適中。（3）將瑞氏染色血涂片置于載物臺上并正對通光孔的中心。2.低倍鏡觀察（1）轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器，使低倍鏡（10目鏡×10物鏡）對準樣本上方。從側(cè)面觀察，調(diào)節(jié)粗準焦螺旋將物鏡降至距標本約0.5cm處。（2）通過目鏡觀察標本，慢慢旋轉(zhuǎn)粗準焦螺旋使載物臺向下至出現(xiàn)物像后調(diào)節(jié)細準焦螺旋至成像清晰。3.高倍鏡觀察  將物鏡轉(zhuǎn)換為高倍鏡（10目鏡×40物鏡），調(diào)節(jié)細準焦螺旋即可看到清晰物像，一般不需要調(diào)節(jié)粗準焦螺旋。4.油鏡觀察  將聚光器升至與載物臺平齊，光柵開至最大，使射入的光線最強。在血涂片的體尾交界處滴上香柏油一滴，轉(zhuǎn)換物鏡為油鏡（10目鏡×100物鏡），調(diào)節(jié)細準焦螺旋至可看到清晰物像。5.收鏡（1）觀察完畢后，取下血涂片，關(guān)閉顯微鏡電源，用滴上清潔液的擦鏡紙將鏡頭擦拭干凈并用綢布擦拭鏡身。（2）將物鏡轉(zhuǎn)換成“八”字形，載物臺、聚光器下降至最低處，輕輕放回顯微鏡箱內(nèi)?！咀⒁馐马棥?.搬動顯微鏡時，勿用一只手提，前后搖擺，使目鏡滑出跌落。2.一定要使用轉(zhuǎn)換器切換鏡頭，以免使光軸發(fā)生彎曲。轉(zhuǎn)動粗、細準焦螺旋時，不要用力過猛，以防止損壞機件。3.嚴禁隨意取出目鏡，以免灰塵掉入鏡筒。嚴禁拆下顯微鏡的其他部件導(dǎo)致部件失落或損壞。4.注意不要短時頻繁開關(guān)顯微鏡，使用間隙時要將光調(diào)節(jié)旋鈕調(diào)至最小。5.使用油鏡時，切記只能將鏡頭上移，不可下移，以免壓碎物品，碰壞鏡頭。6.擦拭目鏡、物鏡的污物應(yīng)用專用的擦鏡紙和清潔液。切勿用手指、紗布和普通紙擦。7.觀察時坐姿端正，腰背挺直，雙眼睜開。雙筒顯微鏡注意調(diào)節(jié)光瞳間距，使雙目觀察到一個單一像，并可旋轉(zhuǎn)左目鏡上的屈光度調(diào)節(jié)環(huán)，補償雙眼視力差。8.低倍鏡主要用于全片觀察、細胞計數(shù)、對尿液中管型以及糞便中寄生蟲的觀察等，因此要注意利用光柵調(diào)節(jié)視野光線強弱，以便觀察到相應(yīng)目標物體；油鏡主要用于細胞的分類和形態(tài)觀察，因此應(yīng)把光柵充分開大，保證射入的光線最強。9.如視場中出現(xiàn)污點應(yīng)檢查并徹底擦凈目鏡、聚光鏡、濾色鏡。10.顯微鏡的工作溫度范圍一般為5～40℃，存放的環(huán)境應(yīng)防震、防曬、防塵、防潮。【方法學(xué)評價】光學(xué)顯微鏡成本低廉，操作簡便，無需特殊的實驗條件，主要用于細胞、微生物、寄生蟲蟲卵等形態(tài)學(xué)方面的檢測，對形態(tài)的識別直觀準確，已成為臨床檢驗中必不可少的檢測工具。但光學(xué)顯微鏡對未染色的細胞立體形態(tài)不如相差顯微鏡清晰，對培養(yǎng)瓶中的細胞不如倒置顯微鏡易觀察，沒有熒光顯微鏡、暗視野顯微鏡的功能。【思考題】1.使用顯微鏡觀察物體時應(yīng)注意什么？2.怎樣使用低倍鏡、高倍鏡和油鏡觀察物體？（程樹強）實驗二  微量吸管的使用【實驗?zāi)康摹?   1.掌握微量吸管的正確使用方法。2.掌握影響微量吸管吸血量準確性的各種因素?！緦嶒炘怼繑D壓帶孔的乳膠吸頭使微量吸管產(chǎn)生負壓而吸取液體?！緦嶒炂鞑摹?.器材  一次性微量吸管、帶孔乳膠吸頭、試管、試管架、干棉球、2ml刻度吸管、一次性醫(yī)用乳膠手套。2.試劑  生理鹽水。3.標本  健康人抗凝血?！緦嶒灢襟E】1.準備（1）將微量吸管的紅色線插管端插入帶孔乳膠吸頭的連接處上，注意兩者間應(yīng)連接嚴密不漏氣。（2）加稀釋液：取試管1支，加生理鹽水2ml。2.使用微量吸管采血（1）持管吸血：有兩種方法，可根據(jù)掌握熟悉情況自主選擇（表1唱2唱1）。（2）拭余血：用干棉球順微量吸管口方向拭凈管外余血，并輕輕蘸拭管尖口，以蘸出超過刻度線2mm以內(nèi)的少量余血，使其退回到刻度線，確保吸血量的準確。（3）釋放血液：將微量吸管插入含生理鹽水的試管底部，食指或拇指蓋住吸頭頂端或側(cè)面的小孔加壓乳膠吸頭，將微量吸管內(nèi)的血液緩慢輕輕的吹出，再用上清液反復(fù)沖洗管內(nèi)余血2～3次，并立即混勻。【注意事項】1.吸取抗凝血標本時，注意管尖不能離開液面，如是末梢采血時，管尖口也不能離開血滴，以免吸入空氣產(chǎn)生氣泡；吸血時也不要用力過猛，將血液吸入乳膠吸頭。2.吸血量不能超過所需容量刻度線2mm，以免黏附管壁多余的血液影響血細胞計數(shù)結(jié)果。3.若吸血量不到所需容量刻度線時，抗凝血可以吹出管內(nèi)血液后，重新吸血，但若是末梢采血則不能（詳見實驗五末梢采血）。4.為了避免患者之間的交叉感染，微量吸管必須一人一管，一次性使用。5.臨床血常規(guī)檢查較多，故一次性微量吸管的使用量大，不可能鑒定每一根微量吸管的質(zhì)量，可采取抽樣方式進行，即從每一批購進的一次性微量吸管中，按隨機抽樣原則至少抽取50支，用認可方法如水銀稱重法、純水稱重法、比色法等對其進行鑒定，凡微量吸管誤差≤允許誤差±1%者為合格，否則為不合格。所抽樣品中至少90%以上是合格品，其余不合格者的誤差均在±1%～±2%，且所抽樣品CV≤1%，可認為這批微量吸管合格，能用于臨床。如不能滿足要求，建議可更換吸管批號再鑒定，若還不行，最好更換廠家，并做好鑒定記錄，以確保微量吸管的質(zhì)量。6.使用廢棄的微量吸管屬于銳利物類醫(yī)用廢物，必須放于專用的一次性利器廢物盒內(nèi)，24小時內(nèi)由指定的醫(yī)療廢物處理單位回收，48小時內(nèi)徹底安全焚燒?！痉椒▽W(xué)評價】一次性微量吸管由于采用一人一管，一次性使用，可有效地避免原血紅蛋白微量吸管重復(fù)使用采血而可能引起患者之間的交叉感染?！舅伎碱}】1.哪些因素可影響一次性微量吸管取血量準確性和精密度？2.怎樣控制微量吸管采血的質(zhì)量？（夏曙華）實驗三  改良Neubauer計數(shù)盤的使用【實驗?zāi)康摹?.掌握改良Neubauer計數(shù)盤的結(jié)構(gòu)、注意事項和正確使用的方法。2.了解改良Neubauer計數(shù)盤的校正?！緦嶒炘怼繉⒁欢ū稊?shù)稀釋的血液或體液混勻后，滴入具有精密劃分刻度和相應(yīng)固定體積的血細胞計數(shù)盤中，根據(jù)標本和計數(shù)的細胞不同，在顯微鏡下選擇相應(yīng)的方格計數(shù)一定容積內(nèi)的細胞數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)，即可換算成單位體積內(nèi)的某種細胞數(shù)?！緦嶒炂鞑摹?.器材  改良牛鮑（Neubauer）計數(shù)盤及蓋玻片、普通光學(xué)顯微鏡、綢布、微量吸管、1ml和2ml刻度吸管、大試管（15mm×100mm）、小試管（10mm×100mm）及試管架、記號筆。改良牛鮑計數(shù)盤為優(yōu)質(zhì)厚玻璃制成，每塊計數(shù)盤由“H”型凹槽分為兩個相同的計數(shù)池，計數(shù)池兩側(cè)各有一條支持柱，比計數(shù)池平面高0.10mm。將特制的專用蓋玻片覆蓋其上，蓋玻片與計數(shù)池間形成0.1mm的縫隙（圖1唱3唱1）。計數(shù)池為長、寬各3.00mm的方格，被平分為9個大方格，每個大方格的邊長為1.0mm，面積為1.0mm×1.0mm＝1.0mm2，容積為1.0mm2×0.1mm＝0.1mm3（相當于0.1μl）。中央大方格用雙線分成25個中方格，每個中方格又用單線分為16個小方格，共400個小方格，其中位于正中及四角的5個中方格為紅細胞和血小板計數(shù)區(qū)。四角的4個大方格用單線劃分為16個中方格，作白細胞計數(shù)用（圖1唱3唱2）。2.試劑  紅細胞稀釋液、白細胞稀釋液。3.標本  EDTA鹽抗凝血?！緦嶒灢襟E】1.計數(shù)盤的準備  用綢布拭凈血細胞計數(shù)盤和蓋玻片，采用“推式蓋片法”即從計數(shù)盤一側(cè)的計數(shù)池下緣向另一側(cè)計數(shù)池方向平推血蓋片，將其蓋于計數(shù)池上備用。2.稀釋血液  取大小試管各1支，大試管標注RBC，加紅細胞稀釋液2ml、抗凝血10μl，小試管標注WBC，加白細胞稀釋液0.38ml、抗凝血20μl，均立即混勻備用。取抗凝血稀釋的操作按照本章實驗二步驟進行。3.充池  充分混勻RBC懸液，用微量吸管吸取其細胞懸液，沿計數(shù)盤和蓋玻片交界的狹縫處緩慢滴入，由于虹吸作用使液體順其間隙充滿計數(shù)池；以同樣方法再取WBC懸液在另一側(cè)計數(shù)盤充池，將計數(shù)盤平置于桌面上靜置2～3min，待細胞下沉。4.顯微鏡細胞計數(shù)（1）將計數(shù)盤置于顯微鏡鏡臺上，調(diào)低聚光器，調(diào)節(jié)顯微鏡光柵大小，用低倍鏡觀察計數(shù)盤的整個結(jié)構(gòu)（大、中、小方格）及特征，同時觀察血細胞是否均勻分布，嚴重分布不均時應(yīng)重新充池。（2）在低倍鏡下選擇計數(shù)池四角的4個大方格計數(shù)白細胞，在高倍鏡下選擇計數(shù)池中央大方格位于正中及四角的5個中方格計數(shù)紅細胞?！咀⒁馐马棥?.擦拭計數(shù)盤和蓋玻片應(yīng)選用清潔、干燥、柔軟的綢布為宜，切勿用粗糙織物擦拭，以免磨損計數(shù)盤上的刻度。擦拭后手指不能接觸其玻璃表面，以防污染油膩導(dǎo)致充液時產(chǎn)生氣泡。2.加蓋玻片的方式不同可影響充液高度，WHO推薦采用“推式”加蓋玻片法。3.充液前應(yīng)適當用力旋轉(zhuǎn)試管使稀釋血液中血細胞充分混勻，且需避免搖出過多氣泡，使血細胞黏在管壁上，影響計數(shù)結(jié)果。4.計數(shù)盤需平放，充池須一次完成，充液量以液體恰好充滿計數(shù)池為宜，如充液量過少計數(shù)池的單位體積內(nèi)細胞懸液量不足，過多使懸液外溢，斷續(xù)充液易產(chǎn)生氣泡或充液后蓋片移動等，均可使細胞分布不勻，應(yīng)拭凈計數(shù)盤及蓋玻片后重新充池。5.充池后白細胞和紅細胞計數(shù)一般需沉淀2～3min，待細胞充分沉淀后再計數(shù)，以避免因細胞不在計數(shù)池的同一平面視野而漏計。但沉淀時間不能過長，因計數(shù)池內(nèi)稀釋液揮發(fā)影響計數(shù)結(jié)果。6.計數(shù)紅細胞用高倍鏡，計數(shù)白細胞用低倍鏡。細胞計數(shù)應(yīng)按一定順序，即呈“弓”字形的移動視野，逐格進行計數(shù)，對于壓線細胞按數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右的原則進行（圖1唱3唱3），避免漏計或重復(fù)計數(shù)。7.計數(shù)細胞時，應(yīng)左手推動顯微鏡的推動器，右手調(diào)節(jié)顯微鏡的微調(diào)螺旋，以便識別或鑒別細胞、非細胞成分。8.血蓋片應(yīng)為血細胞計數(shù)盤的專用蓋片，其規(guī)格為24.0mm×20.0mm×0.6mm，要求蓋片兩面平整光滑，平面誤差應(yīng)＜±0.002mm，高倍鏡無裂隙，有一定的重量，不被細胞懸液所抬浮。血蓋片的均勻厚度鑒定：用微米級千分尺對其厚度進行多點檢測（至少9個區(qū)，每區(qū)測2個點），各點的最大厚度差應(yīng)≤±2μm為合格。血蓋片的平整度鑒定：①用平面平晶儀檢測蓋玻片兩表面的干涉條紋，其條紋細密均勻或微量彎曲即為合格。②拭凈待測血蓋片后，將其覆于標準血蓋片上，在適當光線下有均勻完整彩虹出現(xiàn)者為合格。③將拭凈的蓋玻片反貼在光滑清潔的平面反光鏡上，立即將反光鏡水平抬起，若血蓋片能被反光鏡吸附，且吸附時間較長（越長越好），最后呈圓弧形旋轉(zhuǎn)落下為合格（兩面都應(yīng)檢查）。

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