生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教程

內(nèi)容概要

　　《普通高等教育“十二五”重點(diǎn)規(guī)劃教材·生命科學(xué)應(yīng)用型系列教材：生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教程》分四個(gè)部分，第一部分是實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)理論部分，包括生物化學(xué)須知、生物大分子提取與分離、分光光度法及比色分析法、電泳法技術(shù)、層析技術(shù)、離心技術(shù)、透析技術(shù)。第二部分以實(shí)驗(yàn)為主體，闡述了常用的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)技術(shù)、綜合性實(shí)驗(yàn)、設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)。《普通高等教育“十二五”重點(diǎn)規(guī)劃教材·生命科學(xué)應(yīng)用型系列教材：生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教程》的目的是培養(yǎng)學(xué)生嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)態(tài)度，獨(dú)立思維以及獨(dú)立完成實(shí)驗(yàn)過程的能力。
　　《普通高等教育“十二五”重點(diǎn)規(guī)劃教材·生命科學(xué)應(yīng)用型系列教材：生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教程》適用于高等院校的生物科學(xué)、生物技術(shù)、生物工程、動(dòng)物科學(xué)、農(nóng)業(yè)科學(xué)、園藝、食品科學(xué)等專業(yè)學(xué)生使用，也可供相關(guān)技術(shù)人員參考。

書籍目錄

第一部分 生物化學(xué)技術(shù)概論
1 生物化學(xué)須知
1.1 生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)發(fā)展簡史
1.2 實(shí)驗(yàn)室規(guī)則
1.3 實(shí)驗(yàn)室安全及防護(hù)知識(shí)
1.4 實(shí)驗(yàn)報(bào)告
1.5 實(shí)驗(yàn)室基本操作
1.6 緩沖溶液與pH測定
1.7 生化實(shí)驗(yàn)室的基本設(shè)施與裝備
2 生物大分子提取與分離
2.1 實(shí)驗(yàn)材料的處理
2.2 生物材料處理的常用方法
2.3 目的物分離與提取
2.4 目的物的沉淀分離
2.5 過濾與膜分離技術(shù)
2.6 溶劑萃取法
2.7 反膠束萃取
2.8 超臨界（流體）萃取
3 分光光度法及比色分析法
3.1 原理
3.2 分光光度計(jì)的構(gòu)造
3.3 7220型分光光度計(jì)
4 電泳法
4.1 電泳的基本原理
4.2 影響電泳的主要因素
4.3 區(qū)帶電泳的分類
4.4 幾種常見的電泳方法
5 層析技術(shù)
5.1 層析技術(shù)概述
5.2 凝膠層析
5.3 離子交換層析
5.4 親和層析
5.5 具體的一些層析方法
5.6 高效液相色譜
6 離心技術(shù)
6.1 基本原理．
6.2 離心機(jī)的主要構(gòu)造和類型
6.3 離心技術(shù)的應(yīng)用
6.4 電動(dòng)離心機(jī)的使用方法及注意事項(xiàng)
7 透析
7.1 膜
7.2 溶劑
7.3 物理?xiàng)l件
7.4 董南（Donnan）膜平衡
第二部分 生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)1 生物化學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)1.1 糖類的性質(zhì)實(shí)驗(yàn)（糖的顏色反應(yīng)）
實(shí)驗(yàn)1.2 糖類的性質(zhì)實(shí)驗(yàn)（糖的還原作用）
實(shí)驗(yàn)1.3 總糖的測定——硫酸蒽酮法
實(shí)驗(yàn)1.4 血糖的定量測定
實(shí)驗(yàn)1.5 3，5-二硝基水楊酸比色法測定糖的含量
實(shí)驗(yàn)1.6 糖的薄層層析
實(shí)驗(yàn)1.7 粗脂肪的定量測定——索氏抽提法
實(shí)驗(yàn)1.8 脂肪酸的β-氧化
實(shí)驗(yàn)1.9 碘值的測定
實(shí)驗(yàn)1.10 酸價(jià)的測定
實(shí)驗(yàn)1.11 膽固醇的測定
實(shí)驗(yàn)1.12 卵磷脂的提取及鑒定
實(shí)驗(yàn)1.13 氨基酸的分離鑒定——紙層析法
實(shí)驗(yàn)1.14 氨基酸分離——雙向?qū)游龇?br />實(shí)驗(yàn)1.15 蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)、顏色反應(yīng)及等電點(diǎn)的測定
實(shí)驗(yàn)1.16 雙縮脲法測定蛋白質(zhì)含量
實(shí)驗(yàn)1.17 Folin-酚法測定蛋白質(zhì)含量
實(shí)驗(yàn)1.18 微量凱氏定氮法
實(shí)驗(yàn)1.19 SDS-PAGE測定蛋白質(zhì)分子量
實(shí)驗(yàn)1.20 葡聚糖凝膠層析脫鹽
實(shí)驗(yàn)1.21 醋酸纖維素薄膜電泳分離血清蛋白
實(shí)驗(yàn)1.22 血清蛋白質(zhì)聚丙烯酰胺凝膠電泳
實(shí)驗(yàn)1.23 考馬斯亮藍(lán)法測蛋白質(zhì)濃度
實(shí)驗(yàn)1.24 紫外吸收法測定蛋白質(zhì)含量
實(shí)驗(yàn)1.25 脲酶Km值簡易測定法
……
附錄
主要參考文獻(xiàn)

章節(jié)摘錄

版權(quán)頁：   插圖：   2.4.2.4 復(fù)合沉淀法 在溶液中加入某些物質(zhì)，使它與蛋白質(zhì)等形成復(fù)合物而沉淀下來，從而達(dá)到分離的方法，稱為復(fù)合沉淀法。分離出復(fù)合沉淀后，有的可以直接應(yīng)用，如菠蘿蛋白酶用單寧沉淀法得到的單寧一菠蘿蛋白酶復(fù)合物，可以直接作為藥品，用于治療咽喉炎等。也可以再用適當(dāng)?shù)姆椒?，使酶從?fù)合物中析出，而進(jìn)一步純化。 常用的復(fù)合沉淀劑有單寧、聚乙二醇、聚丙烯酸等高分子聚合物。 例如，以單寧為沉淀劑進(jìn)行酶的復(fù)合沉淀，在操作時(shí)，先將酶溶液調(diào)節(jié)到一定的pH（不同的酶，應(yīng)調(diào)節(jié)在不同的pH，一般控制在pH 4～7的范圍內(nèi)），然后加入一定量的單寧（一般單寧的加入量，為酶溶液的0.1％～1％），生成酶一單寧復(fù)合物沉淀。分離出的酶一單寧復(fù)合物可以直接應(yīng)用。如果要進(jìn)一步純化，可將沉淀分離出來后，用乙醇或丙酮處理以除去單寧；也可以用pH8～11的碘酸鈉或硼酸鈉處理，使酶溶解出來，而單寧仍然為沉淀；還可以采用吐溫60（聚氧乙烯山梨糖醇硬脂酸酯）、吐溫80（聚氧乙烯山梨糖醇油酸酯）、分子量大于6000的PEG（聚乙二醇）或PVP（聚乙烯氮戊環(huán)酮）等大分子進(jìn)行復(fù)分解反應(yīng)。這些大分子聚合物可與單寧形成難溶于水的樹脂狀沉淀，而使酶游離出來。單寧復(fù)合沉淀法適用于各種來源的蛋白酶、淀粉酶、糖化酶、果膠酶、纖維素酶等的沉淀分離。 再如，聚丙烯酸也可以作為復(fù)合沉淀劑，用于酶的沉淀分離。在使用時(shí)，將酶液調(diào)節(jié)至pH 3～5，加入適量的聚丙烯酸（一般為酶蛋白量的30％～40％），生成酶一聚丙烯酸沉淀。進(jìn)一步純化是將沉淀分離出來后，用稀堿液調(diào)節(jié)pH至6以上，則復(fù)合物中的酶與聚丙烯酸分開，再加入一定量的Ca2+、M92+、Al3+等金屬離子，與聚丙烯酸反應(yīng)生成聚丙烯酸鹽沉淀，而使酶游離出來。分離得到的聚丙烯酸鹽沉淀，可以用1mol／L硫酸處理，回收聚丙烯酸循環(huán)使用。 2.4.2.5金屬鹽沉淀法 利用溶液中某種溶質(zhì)與某些金屬離子反應(yīng)，生成金屬鹽沉淀，而與其他組分分離的方法稱為金屬鹽沉淀法。常用的金屬鹽沉淀法有鈣鹽沉淀法、鉛鹽沉淀法等。 例如，在核酸的水提取液中，加入一定體積比（一般為10％左右）的10％氯化鈣溶液，使DNA和RNA均形成鈣鹽，再加入1／5體積的乙醇，DNA—Ca即沉淀析出。 再如，在含有倍半萜的乙醇抽提液中，加入4％的乙酸鉛溶液，減壓除去乙醇，即可得到倍半萜的鉛鹽沉淀。脫鉛的方法通常是通人硫化氫氣體，生成溶解度更小的硫化鉛，而得到倍半萜。

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