中藥實(shí)驗(yàn)研究技術(shù)與設(shè)備

內(nèi)容概要

　　邊寶林、曹軍、郝慶秀主編的《中藥實(shí)驗(yàn)研究技術(shù)與設(shè)備》分為上、下兩篇。上篇系統(tǒng)介紹目前在教學(xué)、科研等方面已經(jīng)具備的中藥實(shí)驗(yàn)研究技術(shù)，包括中藥鑒定技術(shù)、中藥化學(xué)和中藥質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)技術(shù)、生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)、病理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)、中藥藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)和中藥制劑技術(shù)；下篇介紹中藥研究領(lǐng)域的部分常用儀器設(shè)備。
　　《中藥實(shí)驗(yàn)研究技術(shù)與設(shè)備》對(duì)中醫(yī)藥不同專業(yè)的技術(shù)人員、研究生和相關(guān)人員均有一定的參考價(jià)值。

書籍目錄

上篇　中藥實(shí)驗(yàn)研究技術(shù)
　1　中藥鑒定技術(shù)
　　1.1　基源鑒別
　　1.2　性狀鑒別
　　1.3　顯微鑒定
　　1.4　理化鑒定
　　1.5　中藥分子鑒定技術(shù)
　2　中藥化學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)
　　2.1　光譜分析技術(shù)
　　2.2　色譜分析技術(shù)
　　2.3　質(zhì)譜
　　2.4　聯(lián)用技術(shù)
　　2.5　熱分析技術(shù)
　　2.6　中藥化學(xué)成分的分離和制備
　　2.7　中藥質(zhì)量控制
　3　生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)
　　3.1　離心技術(shù)
　　3.2　層析技術(shù)
　　3.3　電泳技術(shù)
　　3.4　酶學(xué)分析
　　3.5　基因技術(shù)
　　3.6　光譜分析技術(shù)
　　3.7　生物大分子物質(zhì)的分離和提純
　　3.8　細(xì)胞學(xué)技術(shù)
　4　病理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)
　　4.1　病理組織切片和染色技術(shù)
　　4.2　顯微攝像及圖像分析技術(shù)
　　4.3　電子顯微鏡技術(shù)
　5　中藥藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)
　　5.1　中藥毒性試驗(yàn)
　　5.2　中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法
　　5.3　實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
　　5.4　動(dòng)物模型
　　5.5　中藥功效的研究
　6　中藥制劑技術(shù)
　　6.1　提取分離技術(shù)
　　6.2　制劑成型技術(shù)
　　6.3　現(xiàn)代制劑技術(shù)
　　6.4　經(jīng)皮給藥技術(shù)
　　6.5　生物黏附給藥系統(tǒng)
下篇　中藥實(shí)驗(yàn)研究設(shè)備
　1.純水系統(tǒng)
　2.冷凍離心機(jī)
　3.超速離心機(jī)
　4.熒光定量PCR儀
　5.核酸／蛋白分析儀
　6.全自動(dòng)遺傳分析儀
　7.高通量組織研磨儀
　8.手提式基因槍系統(tǒng)
　9.研究級(jí)正置多功能顯微鏡及顯微數(shù)碼照相系統(tǒng)
　10.近紅外光譜儀
　11.原子吸收光譜儀
　12.電感耦合等離子體發(fā)射光譜分析系統(tǒng)
　13.組織包埋機(jī)
　14.冷凍切片機(jī)
　15.旋轉(zhuǎn)石蠟切片機(jī)
　16.全自動(dòng)染色機(jī)
　17.血流變測(cè)試儀
　18.流式細(xì)胞儀
　19.激光多普勒血流檢測(cè)系統(tǒng)
　20.微透析采樣及分析系統(tǒng)
　21.紅細(xì)胞變形儀
　22.細(xì)胞流變培養(yǎng)系統(tǒng)
　23.原子力顯微鏡
　24.全自動(dòng)生化分析儀
　25.全自動(dòng)菌落計(jì)數(shù)儀
　26.體視鏡及成像系統(tǒng)
　27.激光掃描共聚焦顯微鏡
　28.全自動(dòng)高速萬(wàn)能截?cái)鄼C(jī)
　29.全自動(dòng)電腦控溫電熱炒藥機(jī)
　30.全自動(dòng)網(wǎng)帶烘干機(jī)
　31.熱回流提取濃縮機(jī)組
　32.中藥粉碎裝置
　33.真空及常壓干燥系統(tǒng)
　34.冷凍干燥機(jī)
　35.噴霧干燥機(jī)
　36.干式制粒機(jī)
　37.小型流化床
　38.混合制粒包衣設(shè)備
　39.旋轉(zhuǎn)壓片機(jī)
　40.高壓均質(zhì)機(jī)
　41.恒濕恒溫箱組
　42.超微粉碎機(jī)組
　43.黏度計(jì)
　44.溶出度測(cè)試系統(tǒng)
　45.堆密度測(cè)試儀
　46.透皮溶出度自動(dòng)系統(tǒng)
　47.粉末及顆粒流動(dòng)性測(cè)試儀
　48.片劑硬度儀
　49.自動(dòng)脆碎度分析儀
　50.視頻旋轉(zhuǎn)滴張力儀
　51.熱活性檢測(cè)儀
　52.光合作用測(cè)定儀
　53.全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)
　54.連續(xù)流動(dòng)分析儀
　55.植物生長(zhǎng)檢測(cè)控制室
　56.氣相色譜儀
　57.庫(kù)侖陣列電化學(xué)高效液相色譜儀
　58.高效液相色譜儀
　59.液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)
　60.高效液相離子阱質(zhì)譜儀
　61.差示掃描量熱儀
　62.高壓制備液相色譜儀
參考文獻(xiàn)

章節(jié)摘錄

版權(quán)頁(yè):1 中藥鑒定技術(shù) 中藥鑒定是應(yīng)用中藥學(xué)、植物學(xué)、動(dòng)物學(xué)、礦物學(xué)、化學(xué)、物理學(xué)及計(jì)算機(jī)等自然科學(xué)知識(shí)和方法，對(duì)中藥的來(lái)源、質(zhì)量、資源及標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)定研究。中藥鑒定的樣品情況比較復(fù)雜，可有整材、飲片、碎塊或粉末，有的藥材可憑經(jīng)驗(yàn)直觀確定，有的則需要借助儀器、試劑等手段才能確定。因此，中藥鑒定的方法是多種的，常用的鑒定方法有基源鑒別、性狀鑒別、顯微鑒定、理化鑒定、分子鑒定等。 1.1 基源鑒別基源鑒別 是應(yīng)用植（動(dòng)、礦）物的分類學(xué)知識(shí)及解剖學(xué)知識(shí)來(lái)鑒定中藥的生物學(xué)來(lái)源，確定其正確的原植（動(dòng)、礦）物種以及名稱、部位和加工情況，以保證品種準(zhǔn)確無(wú)誤。鑒定的步驟包括形態(tài)觀察、文獻(xiàn)核對(duì)和標(biāo)本核對(duì)等。 1.1.1 形態(tài)觀察 形態(tài)觀察應(yīng)對(duì)完整、較完整的中藥材的樣品的營(yíng)養(yǎng)器官（根、莖、葉）和繁殖器官（花、果實(shí)、種子、孢子囊、孢子）的形態(tài)、結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒別，尤其應(yīng)注意對(duì)其繁殖器官（花、果實(shí)或孢子囊、子實(shí)體等）的觀察。對(duì)碎塊、粉末、孢粉要進(jìn)行顯微、亞顯微鑒定，以保證品種的正確性。對(duì)于不完整的樣品，通常要追究其原植物，包括深入到產(chǎn)地進(jìn)行調(diào)查、采集完整植物標(biāo)本以進(jìn)行對(duì)照，以及最后鑒定其正確學(xué)名（中藥拉丁名）等。 1.1.2 文獻(xiàn)核對(duì) 根據(jù)已觀察到的形態(tài)特征，結(jié)合樣品的產(chǎn)地、別名、功效等線索，查閱全國(guó)性或地方性的中草藥書籍和圖鑒進(jìn)行對(duì)照分析。核對(duì)文獻(xiàn)時(shí)，首先要查閱植物分類學(xué)著作，如.中國(guó)植物志.、.中國(guó)高等植物圖鑒.及地方植物志等，然后再查閱有關(guān)中藥品種方面的著作，如.中藥志.、.中藥材品種論述.、.中藥鑒別手冊(cè).，必要時(shí)還須查閱原始文獻(xiàn)，查閱全國(guó)性的、地方性的植物分類學(xué)的專著進(jìn)行標(biāo)本核對(duì)，以使鑒定結(jié)果準(zhǔn)確無(wú)誤。 1.1.3 標(biāo)本核對(duì) 當(dāng)確定了樣品的科屬以后，核對(duì)已經(jīng)定了學(xué)名的該科屬的標(biāo)本，也可根據(jù)較權(quán)威的文獻(xiàn)核對(duì)正確可靠的、已定學(xué)名的相應(yīng)標(biāo)本。如能與模式標(biāo)本（發(fā)表新種時(shí)被用來(lái)描述植物特征的植物標(biāo)本）核對(duì)，對(duì)正確鑒定更為有利。 1.2 性狀鑒別 藥材的“性狀”是指藥材宏觀的感官特征，即藥材的軟硬、堅(jiān)韌、疏松、致密、黏性、粉性等特征，以及藥材的色澤與表面特征、質(zhì)地與斷面特征和氣味特征等，為區(qū)別藥材質(zhì)量?jī)?yōu)劣提供依據(jù)。對(duì)藥材進(jìn)行性狀鑒定，主要是靠人工用眼、手、鼻、口、舌等來(lái)鑒別藥材外觀性狀和質(zhì)地。這些傳統(tǒng)的鑒別經(jīng)驗(yàn)直觀性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)單，是藥材鑒定工作者必須具備的基本功。 1.2.1 外觀鑒別 性狀鑒別是運(yùn)用看、摸、聞、嘗以及水試、火試等直觀的方法對(duì)中藥的性狀（包括形狀、大小、色澤、表面、質(zhì)地、斷面、氣味等）特征進(jìn)行觀察并作為鑒別的依據(jù)。 性狀鑒別主要是觀察完整的中藥及飲片。 1.2.1.1 形狀 藥材的形狀與藥用部位密切相關(guān)，根、根莖、莖、枝、皮、葉、花、果實(shí)、種子等器官的形態(tài)各不相同，必須用植物學(xué)的知識(shí)和術(shù)語(yǔ)進(jìn)行鑒別和描述。例如野生人參以“蘆長(zhǎng)碗密棗核丁，緊皮細(xì)紋珍珠須”為好，防風(fēng)根莖如“蚯蚓頭”等，而有些藥材須先用水浸泡，展平后才能觀察。 1.2.1.2 大小 藥材的大小是指對(duì)藥材的長(zhǎng)短、粗細(xì)、厚薄均有一定的要求，這需要觀察較多的樣品才能得出較正確的數(shù)值，最后判斷出好、中、差。 1.2.1.3 顏色 藥材的顏色各有不同，但均有一定的要求，例如茜草、丹參為紅色，黃連為黃色，紫草為紫色，烏梅為黑色等。藥材的顏色是否符合要求，是衡量藥材質(zhì)量的重要因素。 1.2.1.4 表面特征 表面光滑、粗糙、皺紋、皮孔、毛茸等特征是藥材鑒定的重要指標(biāo)，如雙子葉植物根類藥材頂部常帶有根莖、單子葉植物根莖常具有膜質(zhì)鱗葉、蕨類植物根莖常有葉柄和鱗片等，這些表面特征都是鑒別的重要依據(jù)。 1.2.2 質(zhì)地鑒別 1.2.2.1 斷面 斷面包括縱斷面和橫斷面，對(duì)根、根莖、莖、枝、皮類的斷面的觀察是重要的鑒別方式之一。鑒別時(shí)要注意斷面是否平坦，是呈纖維性、顆粒性或呈裂片狀，有無(wú)膠絲，可否層層剝離等情況。例如，蒼術(shù)斷面放置能“起霜”（白毛狀結(jié)晶），白術(shù)則不“起霜”，杜仲有膠絲相連，大黃根莖有星點(diǎn)，何首烏有云錦狀花紋，黃芪有“菊花心”，粉防己有車輪紋等，這些均為主要的鑒別特征。 1.2.2.2 氣味 某些藥材因含有揮發(fā)油類等物質(zhì)而有特殊的香氣、臭氣或比較固定的味感，可根據(jù)其特殊的氣味進(jìn)行鑒別。例如，石菖蒲、肉桂有香氣，黃連、黃柏味苦，甘草、黨參味甜等。 1.2.2.3 水浸 利用某些中藥在水中發(fā)生浮沉、溶解、顏色變化，或者利用其透明度、膨脹度、旋轉(zhuǎn)性、黏性、酸堿變化等現(xiàn)象進(jìn)行鑒別。有些藥材在水中或遇水能產(chǎn)生特殊的現(xiàn)象，如紅花浸入水中，水變金黃色而花不褪色；蘇木投入熱水中，水顯鮮艷的桃紅色；秦皮加水浸泡，浸出液在日光下呈現(xiàn)藍(lán)色熒光；車前子經(jīng)水浸泡變黏滑，體積膨脹等。 這些現(xiàn)象與藥材所含化學(xué)成分及組織構(gòu)造有關(guān)，可作為鑒別特征之一。 1.2.2.4 火試 根據(jù)中藥受火燃燒后能產(chǎn)生特殊的氣味或者顏色，或者顏色發(fā)生變化，或產(chǎn)生煙霧、響聲，或膨脹、熔融，或聚散等現(xiàn)象進(jìn)行鑒別。例如，降香點(diǎn)燃后香氣濃烈，有油流出，燃后留有白灰等。 1.2.3 飲片鑒別 藥材經(jīng)過(guò)炮制后切制成薄片狀飲片，以便于煎藥時(shí)其有效成分的滲出。加工成飲片的藥材一般有根類、根莖類、莖類、皮類、葉類、果實(shí)類等。一般情況下，通過(guò)切面可對(duì)飲片進(jìn)行初步的觀察鑒別。 1.2.3.1 根類 主要觀察根類藥材的表皮、外皮層、皮層、內(nèi)皮、韌皮部、木質(zhì)部等，次生結(jié)構(gòu)還可以觀察到木栓、木栓形成層、栓內(nèi)層，以及維管形成層、髓、分泌組織、貯藏組織，有些根類藥材可觀察到異形結(jié)構(gòu)。 1.2.3.2 莖類 主要觀察莖類藥材的木栓、木栓形成層、栓內(nèi)層、維管束（木質(zhì)部、韌皮部、形成層）、髓、髓射線等情況，來(lái)對(duì)莖類藥材進(jìn)行鑒別。 1.2.3.3 果實(shí)類 主要觀察果實(shí)類藥材的外果皮、中果皮、內(nèi)果皮等情況。 1.2.3.4 葉類 主要觀察葉類藥材的表皮、海綿組織、維管束、氣孔、表皮毛等。 1.3 顯微鑒定 要對(duì)飲片進(jìn)行精確鑒別，應(yīng)進(jìn)行顯微切片觀察。利用顯微鏡、掃描電鏡或透射電鏡來(lái)觀察藥材的組織、細(xì)胞及其內(nèi)含物等結(jié)構(gòu)特征，以確定其真?zhèn)闻c純度，配合顯微化學(xué)方法可以確定某些品種的有效成分在組織中的分布。顯微鑒定需要按照要求取材，制成顯微標(biāo)本片，中藥的顯微制片有切面制片、粉末制片、表面制片、解離組織制片、花粉粒與孢子制片和成方制劑制片等。在顯微制片時(shí)，可根據(jù)工作需要將顯微片制成臨時(shí)性片或永久性片。臨時(shí)性片是指采用液體溶劑作封藏劑的制片，其制片過(guò)程是將材料的切片或粉末置于載玻片的中央，加適量透化劑（常用水合氯醛），經(jīng)適當(dāng)加熱透化后，加1～2滴封藏劑（常用稀甘油），蓋上蓋玻片而成。此種片制作較簡(jiǎn)便、迅速，但是不宜久藏，一般性試驗(yàn)多采用此方法。采用樹脂性封固劑（如加拿大樹膠、中性樹膠等）固封而制成的制片保存時(shí)間長(zhǎng)，多用于研究性制片。 1.3.1 制片方法 1.3.1.1 切面制片 將中藥材料切成10～20μm的薄片，經(jīng)透化處理后制成顯微觀察片，主要用來(lái)觀察中藥材的組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞形態(tài)特征，可分為橫切片和縱切片。 1.3.1.2 粉末制片 將能通過(guò)孔徑180～250μm篩（藥典4～5號(hào)篩）的中藥材料粉末適量，經(jīng)透化處理后制成顯微觀察片，主要用來(lái)觀察藥材的細(xì)胞形態(tài)特征和組織碎塊特征。 1.3.1.3 表面制片 切取一部分藥材材料或撕取其部分表皮，經(jīng)透化處理后制成顯微觀察片，主要用來(lái)觀察藥材表皮細(xì)胞形態(tài)及附著物的特征等。 1.3.1.4 解離組織制片 將藥材切成寬或厚約5mm的小條或片段，用適當(dāng)化學(xué)試劑處理，使其組織分離后制成顯微觀察片。解離組織制片適用于不宜制作切面片、質(zhì)地較堅(jiān)硬的藥材，用來(lái)觀察其細(xì)胞形態(tài)特征等，依解離組織所用化學(xué)試劑的情況又分為氫氧化鉀法、氯酸鉀法等制片方法。 1.3.1.5 花粉粒與孢子制片 將花粉、孢子囊群、花藥或小的花朵的干燥品浸泡于冰醋酸中軟化，用玻棒搗碎、離心，取沉淀加入新鮮配制的醋酸酐與硫酸（9∶1）的混合液，置水浴上加熱數(shù)分鐘后離心，取沉淀，用水洗滌，用品紅甘油膠封片，也可以用水合氯醛試劑封片，然后鏡下觀察其特征。 1.3.1.6 成方制劑制片 散劑按照粉末制片方法制片，丸劑、片劑等可取2～3丸（片）研細(xì)后取少量，滴加規(guī)定試劑，攪拌均勻后制片。蜜丸可直接挑取少量材料制片，或酌情用熱水脫蜜后制片，然后鏡下觀察其特征。 1.3.2 切片方法 1.3.2.1 徒手切片法 徒手切片法的方法比較簡(jiǎn)單，無(wú)須大型機(jī)械和特定場(chǎng)所，是中藥材顯微鑒定中最常用的制片方法之一。操作步驟如下： （1）切片：先把材料的斷面用刀修理平整。切片前刀片和材料應(yīng)用水濕潤(rùn)，并在切片過(guò)程中經(jīng)常用水濕潤(rùn)材料和刀片，防止材料干燥。連續(xù)切下幾片后，把刀在水中蕩滌，使材料由刀蕩入水中。如此反復(fù)，直到切出滿意的切片為止。 （2）裝片：選擇極薄（肉眼看上去呈半透明狀）的切片，完整的或不完整的均可，不完整的切片需多選擇幾片，使各部分都有代表性，然后用鑷子輕輕地將其移至載玻片中央，用濾紙吸干水滴，在材料上滴加1～2滴裝置液，蓋上蓋玻片。注意蓋蓋玻片時(shí)應(yīng)緩慢，以防止產(chǎn)生氣泡。常用的裝置液為蒸餾水、水合氯醛或甘油醋酸。 1.3.2.2 石蠟切片法 石蠟切片法是將組織塊經(jīng)石蠟包埋后進(jìn)行切片的方法，石蠟制片的優(yōu)點(diǎn)是容易操作，切片厚度可控制（2～10μm），有利于連續(xù)切片，能永久保存。具體操作步驟如下： （1）取材。 （2）固定：將新鮮材料浸于固定液中，固定時(shí)間為10～24小時(shí)或更長(zhǎng)。常用的固定液為多聚甲醛，干燥藥材無(wú)須固定。 （3）脫水：為了使二甲苯充填到各個(gè)細(xì)胞內(nèi)以利于石蠟的浸入，必須除凈材料細(xì)胞內(nèi)的水分。常用的脫水劑為乙醇。脫水是逐級(jí)進(jìn)行的，不可太快，否則會(huì)引起組織皺縮或脫水不徹底，致使石蠟不能充滿整個(gè)細(xì)胞，從而導(dǎo)致制片失敗。將材料浸入各濃度級(jí)（30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%）乙醇中，一般每隔1～3小時(shí)更換一次乙醇，在高濃度乙醇中時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，以免細(xì)胞變形，無(wú)水乙醇需更換一次，每次0.5～1小時(shí)，以利于脫水徹底。 （4）透明：用透明劑將材料中的乙醇除去，以利于石蠟順利進(jìn)入組織中，并增強(qiáng)組織的折光系數(shù)。常用的透明劑為二甲苯，在透明過(guò)程中，為防止材料收縮、變脆，應(yīng)由低濃度到高濃度分級(jí)進(jìn)行，進(jìn)入純二甲苯時(shí)，需更換一次試劑，直至材料完全透明為止。 （5）透蠟：是使支持劑即石蠟浸入細(xì)胞取代細(xì)胞中的二甲苯。在55℃下，加入固態(tài)石蠟時(shí)，應(yīng)由少漸增多，分次加入，最后換入純蠟，使石蠟充滿整個(gè)組織細(xì)胞。當(dāng)材料進(jìn)入純蠟時(shí)，需更換一次純蠟。 （6）包埋：是將材料及已熔融的石蠟制成蠟塊以供切片的過(guò)程。 （7）切片：將包埋有材料的蠟塊修整成適當(dāng)大小，固定于切片機(jī)上，并調(diào)整好刀的角度及切片的厚度后進(jìn)行切片，厚度一般為4～12μm。 （8）貼片：將切片放在約37℃的水面上使之展平，取制備好的載玻片，插入水中，靠近蠟片，然后自然提起載玻片使蠟片粘在玻片上，將其豎放于染色筐中，置37℃恒溫箱中晾干。 （9）染色：染色常用水溶性溶液，因此染色前必須完全去蠟。將石蠟制片在二甲苯中溶去石蠟，并將溶去石蠟的切片材料逐級(jí)浸入各級(jí)濃度乙醇中，下降到水溶液；然后，根據(jù)需要進(jìn)行染色。染色后，組織片脫水上升到二甲苯。 （10）封片：向染色片上滴加1～2滴中性樹脂，蓋上蓋玻片，貼上標(biāo)簽，即可于鏡下觀察。 1.3.3 細(xì)胞壁性質(zhì)的鑒別 1.3.3.1 木質(zhì)化細(xì)胞壁 木質(zhì)化細(xì)胞壁加間苯三酚試液1～2滴，稍放置，加鹽酸1滴，細(xì)胞壁因木化程度不同而顯紅色或紫紅色。 1.3.3.2 木栓化細(xì)胞壁 木栓化或角質(zhì)化細(xì)胞壁加蘇丹Ⅲ試液，稍放置或微熱，細(xì)胞壁顯橘紅色至紅色。 1.3.3.3 纖維素細(xì)胞壁 纖維素細(xì)胞壁加氯化鋅碘試液，或先加碘試液濕潤(rùn)后，稍放置，再加硫酸溶液，細(xì)胞壁顯藍(lán)色或紫色。

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