臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)

內(nèi)容概要

　　本書(shū)是全國(guó)高等院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)實(shí)驗(yàn)教學(xué)規(guī)劃教材之一，由國(guó)內(nèi)6所高等醫(yī)藥院校和3所臨床教學(xué)實(shí)習(xí)醫(yī)院參與編寫(xiě)而成。本教材在強(qiáng)調(diào)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)和操作的基礎(chǔ)上重視綜合性實(shí)驗(yàn)和創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)的開(kāi)展。全書(shū)共分基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)及驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)、綜合性實(shí)驗(yàn)和創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)三篇。通過(guò)基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)和經(jīng)典驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)的教學(xué)可以達(dá)到驗(yàn)證理論和培養(yǎng)學(xué)生的基本免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技能的目的。綜合性實(shí)驗(yàn)的教學(xué)一方面可以訓(xùn)練學(xué)生組織和駕馭大型綜合實(shí)驗(yàn)的能力，另一方面可以使學(xué)生提前了解臨床實(shí)驗(yàn)室使用的儀器和開(kāi)展的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目，為臨床實(shí)習(xí)和從事臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)工作打下基礎(chǔ)。創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)可為醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)生進(jìn)一步開(kāi)展科研工作奠定基礎(chǔ)?！度珖?guó)高等院校醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)專(zhuān)業(yè)實(shí)驗(yàn)教學(xué)規(guī)劃教材:臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)(供醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、衛(wèi)生檢驗(yàn)等專(zhuān)業(yè)使用)》可供高等院校醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)、衛(wèi)生檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)學(xué)生實(shí)驗(yàn)使用，也可供從事臨床檢驗(yàn)工作和醫(yī)學(xué)研究的技術(shù)人員參考使用，并可用做臨床醫(yī)學(xué)、醫(yī)學(xué)影像學(xué)、麻醉學(xué)、法醫(yī)學(xué)、預(yù)防醫(yī)學(xué)以及藥學(xué)等專(zhuān)業(yè)實(shí)驗(yàn)教學(xué)的參考用書(shū)。

書(shū)籍目錄

序
前言
第一篇 臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)及驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)
第一章 免疫凝集類(lèi)實(shí)驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)一直接凝集試驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)二 間接凝集試驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)三 間接凝集抑制試驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)四 抗球蛋白試驗(yàn)
第二章 免疫沉淀類(lèi)試驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)一 單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)二 雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)三 對(duì)流免疫電泳試驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)四 火箭免疫電泳
實(shí)驗(yàn)五 免疫電泳試驗(yàn)
第三章 免疫標(biāo)記技術(shù)
實(shí)驗(yàn)一 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)二 酶免疫印跡技術(shù)
實(shí)驗(yàn)三 熒光免疫染色技術(shù)
實(shí)驗(yàn)四 膠體金免疫層析技術(shù)
實(shí)驗(yàn)五 斑點(diǎn)金免疫滲濾技術(shù)
第四章 免疫細(xì)胞分離技術(shù)
實(shí)驗(yàn)一 外周血單個(gè)核細(xì)胞分離
實(shí)驗(yàn)二 外周血T、B細(xì)胞的分離
實(shí)驗(yàn)三 外周血中性粒細(xì)胞分離
第五章 固有免疫功能檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)一 中性粒細(xì)胞趨化功能測(cè)定
實(shí)驗(yàn)二 中性粒細(xì)胞吞噬殺菌功能測(cè)定
實(shí)驗(yàn)三 巨噬細(xì)胞吞噬功能測(cè)定
實(shí)驗(yàn)四 NK細(xì)胞功能測(cè)定
實(shí)驗(yàn)五 溶菌酶測(cè)定
第六章 獲得性免疫功能檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)一 T、B細(xì)胞數(shù)量測(cè)定
實(shí)驗(yàn)二 T細(xì)胞亞群分析
實(shí)驗(yàn)三 T細(xì)胞增殖功能測(cè)定
實(shí)驗(yàn)四 細(xì)胞因子測(cè)定
實(shí)驗(yàn)五 淋巴細(xì)胞抗體生成能力測(cè)定
第七章 免疫自動(dòng)化檢測(cè)技術(shù)
實(shí)驗(yàn)一 流式細(xì)胞術(shù)
實(shí)驗(yàn)二 化學(xué)發(fā)光免疫分析
實(shí)驗(yàn)三 時(shí)間分辨熒光免疫分析技術(shù)
實(shí)驗(yàn)四 酶聯(lián)免疫自動(dòng)化分析技術(shù)
實(shí)驗(yàn)五 免疫比濁分析技術(shù)
第二篇 綜合性實(shí)驗(yàn)
第八章 抗體的制備
實(shí)驗(yàn)一 溶血素的制備及效價(jià)測(cè)定
實(shí)驗(yàn)二 人全血清抗體的制備
實(shí)驗(yàn)三 單克隆抗體的制備
第九章 超敏反應(yīng)的免疫學(xué)檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)一 青霉素皮膚試驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)二 血清總IgE測(cè)定
實(shí)驗(yàn)三 血清特異性IgE測(cè)定
實(shí)驗(yàn)四 過(guò)敏原特異性IgE篩查試驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)五 結(jié)核菌素試驗(yàn)
第十章 自身免疫性疾病的免疫學(xué)檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)一 類(lèi)風(fēng)濕因子測(cè)定
實(shí)驗(yàn)二 抗環(huán)瓜氨酸肽抗體測(cè)定
實(shí)驗(yàn)三 抗核抗體測(cè)定
實(shí)驗(yàn)四 抗核抗體譜分析
實(shí)驗(yàn)五 抗雙鏈DNA抗體測(cè)定
實(shí)驗(yàn)六 抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體測(cè)定
第十一章 感染相關(guān)免疫學(xué)檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)一 抗鏈球菌溶血素“O”抗體測(cè)定
實(shí)驗(yàn)二 乙型肝炎病毒抗原抗體測(cè)定
實(shí)驗(yàn)三 TORCH抗體測(cè)定
實(shí)驗(yàn)四 EBV相關(guān)抗體測(cè)定
實(shí)驗(yàn)五 梅毒螺旋體血清學(xué)檢測(cè)
第十二章 腫瘤免疫學(xué)檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)一 甲胎蛋白定量測(cè)定
實(shí)驗(yàn)二 癌胚抗原測(cè)定
實(shí)驗(yàn)三 糖類(lèi)抗原125測(cè)定
第十三章 移植免疫相關(guān)檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)一 微量淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)
……
第三篇 創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)

章節(jié)摘錄

版權(quán)頁(yè)：插圖：第一篇 臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)及驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn) 第一章 免疫凝集類(lèi)實(shí)驗(yàn)?zāi)囼?yàn)（agglutination）是指細(xì)菌、紅細(xì)胞等顆粒性抗原或可溶性抗原（或抗體）與載體顆粒結(jié)合成致敏顆粒后，再與相應(yīng)抗體（或抗原）在適當(dāng)電解質(zhì)存在下，形成肉眼可見(jiàn)的凝集現(xiàn)象。凝集試驗(yàn)分為直接凝集試驗(yàn)（directagglutinationtest）和間接凝集試驗(yàn)（indirectagglutinationtest）。凝集試驗(yàn)可用于抗原或抗體的檢測(cè)，方法簡(jiǎn)便，但靈敏度不高，多用于定性檢測(cè)，如血型鑒定、細(xì)菌鑒定與分型等，也可用于半定量檢測(cè)，如抗體效價(jià)的檢測(cè)。 實(shí)驗(yàn)一 直接凝集試驗(yàn)直接凝集試驗(yàn)是將顆粒性抗原直接與相應(yīng)抗體相互作用，在操作方法上分為玻片凝集法和試管凝集法兩種。 一、玻片凝集試驗(yàn)玻片凝集試驗(yàn)指在玻片上直接將紅細(xì)胞懸液、受檢細(xì)菌等顆粒性抗原與相應(yīng)抗體混勻，若兩者對(duì)應(yīng)則出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集塊，即為陽(yáng)性；若兩者不對(duì)應(yīng)則無(wú)凝集塊出現(xiàn)，即為陰性。玻片凝集試驗(yàn)主要用于細(xì)菌鑒定與分型、ABO血型鑒定等定性試驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)以人類(lèi)紅細(xì)胞ABO血型鑒定試驗(yàn)（正定型，directtyping）為例，即用已知特異性抗體（標(biāo)準(zhǔn)血清）檢測(cè)紅細(xì)胞上的抗原。 【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?1.掌握ABO血型鑒定（正定型玻片法）的操作方法及結(jié)果判定。 2.熟悉玻片凝集試驗(yàn)的原理及用途。 【實(shí)驗(yàn)原理】在室溫條件下、鹽水介質(zhì)中，將受檢者紅細(xì)胞分別與已知的抗A血清、抗B血清、抗（A+B）血清混合，觀察有無(wú)紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象，判斷受檢者紅細(xì)胞膜表面有無(wú)A抗原和（或）B抗原，據(jù)此，將人類(lèi)紅細(xì)胞ABO血型分為：A型、B型、O型、AB型4種。 【實(shí)驗(yàn)器材】 1.抗原（待檢標(biāo)本）  受檢者5%紅細(xì)胞鹽水懸液。 2.抗體（標(biāo)準(zhǔn)血清）  標(biāo)準(zhǔn)抗A、抗B、抗（A+B）分型血清。 3.生理鹽水。 4.其他  一次性采血針、載玻片、小試管、75%乙醇、消毒棉簽、牙簽、記號(hào)筆、消毒缸、顯微鏡等。 【實(shí)驗(yàn)方法】 1.配制5%紅細(xì)胞懸液 （1）采血部位以左手無(wú)名指為宜，輕輕按摩采血指端，使其自然充血，用75%乙醇棉簽消毒采血部位皮膚，待干。 （2）操作者用左手拇指和示指緊捏刺血部位兩側(cè)，右手持無(wú)菌采血針自指尖腹內(nèi)側(cè)迅速穿刺組織，深2～3mm，立即出針。 （3）待血液自行流出后，用消毒干棉簽擦去第1滴血（因含組織液），如出血不可在針刺四周稍稍加壓（勿用力擠壓，以免組織液混入影響檢測(cè)結(jié)果）。 （4）取1滴血放入裝有0.5ml生理鹽水的小試管內(nèi)混勻，制成紅細(xì)胞懸液（約為5%）備用。 （5）采血完畢，立即用消毒干棉簽壓迫止血。 2.血型鑒定（正定型玻片法） （1）標(biāo)記玻片：取清潔載玻片1張，用記號(hào)筆劃分為3等份，在每格的左上角標(biāo)明抗A、抗B、抗（A+B）。 （2）加標(biāo)準(zhǔn)抗血清：用毛細(xì)滴管分別取抗A、抗B和抗（A+B）分型血清各1滴，滴于相應(yīng)標(biāo)記區(qū)內(nèi)。 （3）加受檢紅細(xì)胞懸液：于上述抗血清小格內(nèi)分別滴加受檢者5%紅細(xì)胞懸液各1滴。 （4）混勻：分別用牙簽攪拌或不斷輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)載玻片，使血清與紅細(xì)胞充分混勻，連續(xù)1～5min，靜置10min以上。 （5）觀察結(jié)果：肉眼觀察有無(wú)凝集（或溶血）現(xiàn)象，如肉眼觀察不清，可將載玻片置于低倍顯微鏡下觀察結(jié)果。 【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】 1.定性 （1）陽(yáng)性：液體變清亮，出現(xiàn)大小不等的紅細(xì)胞凝集塊（或溶血）。 （2）陰性：液體仍然混濁，紅細(xì)胞呈均勻分布，無(wú)凝集塊出現(xiàn)。 2.血型判斷  按表1-1判斷受檢者紅細(xì)胞ABO血型。 3.報(bào)告方式  正定血型（玻片法）X型。 【注意事項(xiàng)】 1.除特殊情況外，不要在耳垂取血。應(yīng)避免在炎癥、水腫、凍瘡等部位采血。 2.嚴(yán)格按無(wú)菌技術(shù)操作，防止采血部位感染，做到一人一針一管，避免交叉感染。皮膚消毒后，須待酒精揮發(fā)、干燥后采血，否則血細(xì)胞被乙醇破壞，且血液會(huì)四處擴(kuò)散，不易成滴而造成采血困難。 3.針刺皮膚應(yīng)快進(jìn)快出，穿刺深度一般以2～3mm為宜。 4.所用分型血清必須在有效期內(nèi)使用，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后應(yīng)放置冰箱保存，以免細(xì)菌污染，使用前應(yīng)平衡至室溫。 5.試管、滴管、玻片等必須清潔干燥，防止溶血。 6.用牙簽混勻時(shí)，勿混用牙簽，以免產(chǎn)生錯(cuò)誤結(jié)果。 7.反應(yīng)時(shí)間不得少于10min，以免較弱的凝集不易出現(xiàn)，造成假陰性。 8.試驗(yàn)結(jié)果要及時(shí)觀察，仔細(xì)核對(duì)、準(zhǔn)確記錄。 二、試管凝集試驗(yàn)試管凝集試驗(yàn)為半定量試驗(yàn)方法，一般均以標(biāo)準(zhǔn)定量抗原（已知抗原）與一系列倍比稀釋的免疫血清或患者待檢血清混合，經(jīng)靜置保溫后，根據(jù)試管中顆粒性抗原的凝集程度，判斷血清中有無(wú)相應(yīng)的抗體及其效價(jià)。臨床上常用的直接試管凝集試驗(yàn)有肥達(dá)試驗(yàn)（Widaltest）、外斐試驗(yàn)（Weil-Felix）和輸血前的交叉配血試驗(yàn)等?，F(xiàn)以肥達(dá)試驗(yàn)為例介紹試管凝集試驗(yàn)。 （一）肥達(dá)試驗(yàn)（傳統(tǒng)試管法）【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?  1.掌握肥達(dá)試驗(yàn)的操作方法（血清連續(xù)倍比稀釋?zhuān)┘敖Y(jié)果的判定。 2.熟悉肥達(dá)試驗(yàn)的原理及用途。 【實(shí)驗(yàn)原理】 人類(lèi)感染傷寒或副傷寒沙門(mén)菌后，經(jīng)1～2周后可在血清中出現(xiàn)相應(yīng)的菌體（O）抗體和鞭毛（H）抗體，以傷寒沙門(mén)菌O、H抗原和甲、乙、丙型副傷寒沙門(mén)菌H抗原，與一系列倍比稀釋的患者血清作試管凝集試驗(yàn)，在適當(dāng)電解質(zhì)參與下，可出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集現(xiàn)象，借以檢測(cè)患者血清中是否存在相應(yīng)的傷寒沙門(mén)菌或甲、乙、丙型副傷寒沙門(mén)菌的抗體及其效價(jià)，用于傷寒、副傷寒的輔助診斷。 【實(shí)驗(yàn)器材】 1.抗原（診斷菌液） 傷寒沙門(mén)菌菌體抗原（TO）及鞭毛抗原（TH），甲型副傷寒沙門(mén)菌鞭毛抗原（PA），乙型副傷寒沙門(mén)菌鞭毛抗原（PB），需要時(shí)可增加丙型副傷寒沙門(mén)菌鞭毛抗原（PC）。 2.抗體 待檢血清，已知傷寒、副傷寒沙門(mén)菌診斷血清。 3.生理鹽水。 4.其他 小試管、中試管、大試管、1ml吸管、5ml吸管、試管架、水浴箱等。 【實(shí)驗(yàn)方法】 1.編號(hào)標(biāo)注  取28只小試管，在試管架上4排7列排放，編號(hào)標(biāo)明。 2.倍比稀釋待檢血清  先將待檢血清做1∶20稀釋?zhuān)椒ㄊ侨≈性嚬?支，加入生理鹽水3.8ml及待檢血清0.2ml，充分混勻，總量4ml。然后取2ml1∶20稀釋血清按每管0.5ml分別加入第1列的4個(gè)試管中。再在剩余2ml稀釋血清的中試管中加生理鹽水2ml，混勻，此時(shí)血清由1∶20稀釋為1∶40，再取此稀釋度的血清2ml，按每管0.5ml分別加入第2列的4個(gè)試管中。如此將中試管中剩余血清做倍比稀釋?zhuān)⒁来螌⑾♂屟寮又恋?至第6列各試管中，則第1列至第6列試管的血清稀釋度依次為1∶20、1∶40、1∶80、1∶160、1∶320、1∶640。第7列各管只加0.5ml生理鹽水，不加血清，作為抗原對(duì)照。 3.稀釋診斷菌液  取4支大試管，分別標(biāo)記TO、TH、PA、PB，以生理鹽水將相應(yīng)診斷菌液稀釋成每毫升含7億個(gè)菌的懸液備用（具體稀釋倍數(shù)參考試劑說(shuō)明書(shū)）。 4.加診斷菌液 第1排各管加入TO稀釋菌液0.5ml。 第2排各管加入TH稀釋菌液0.5ml。 第3排各管加入PA稀釋菌液0.5ml。 第4排各管加入PB稀釋菌液0.5ml。 此時(shí)，各管的血清因加入等量的診斷菌液又被稀釋1倍，第1列至第6列血清最終稀釋度為1∶40～1∶1280。 5.溫育觀察  振蕩混勻，置37℃溫箱或水浴18～24h（或56℃2～4h），觀察記錄結(jié)果見(jiàn)表1-2。 【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】 1.觀察方法  從孵箱或水浴箱中取出試管架后，不要振蕩試管，先觀察第7列各對(duì)照管，應(yīng)均不發(fā)生凝集，再依次逐排觀察各試驗(yàn)管凝集情況。觀察時(shí)將試管舉起仔細(xì)觀察試管內(nèi)上清液的透明度和下沉凝集塊的大小、性狀，然后再輕輕晃動(dòng)試管使凝集塊從管底升起，最后根據(jù)上清液的透明度和凝集塊的大小，即反應(yīng)強(qiáng)度記錄結(jié)果。 2.凝集現(xiàn)象  “O”凝集呈顆粒狀，以較堅(jiān)實(shí)凝集片沉于管底，輕搖試管不易蕩起，且不易散開(kāi)?！癏”凝集呈絮狀，以松散大團(tuán)沉于管底，輕搖試管即蕩起，且極易散開(kāi)。 3.凝集強(qiáng)度  以4+、3+、2+、+、-等符號(hào)表示。 4+：上清液完全透明，細(xì)菌全部凝集成塊沉于管底。 3+：上清液透明度達(dá)75%，大部分細(xì)菌凝集成塊沉于管底。 2+：上清液透明度達(dá)50%，約50%細(xì)菌凝集成塊沉于管底。 +：上清液混濁，透明度僅達(dá)25%，僅小部分細(xì)菌凝集成塊沉于管底。 -：液體均勻混濁，無(wú)凝集塊形成。若靜置時(shí)間較長(zhǎng)，部分細(xì)菌沉于管底呈圓點(diǎn)狀，邊緣整齊，輕輕搖動(dòng)后細(xì)菌分散呈云霧狀升起，但很快即消失。 4.凝集效價(jià)  一般以出現(xiàn)2+凝集的血清最高稀釋倍數(shù)作為該血清的凝集效價(jià)（表1-3）；也可取0.25ml試驗(yàn)菌液加0.75ml生理鹽水混勻，制備與50%透明度相當(dāng)?shù)谋葷峁?，有助凝集效價(jià)的判定。 5.參考區(qū)間  一般認(rèn)為未經(jīng)預(yù)防接種，具有診斷意義的凝集效價(jià)是：TO＞1∶80、TH＞1∶160、PA＞1∶80、PB＞1∶80。 若取雙份血清，效價(jià)≥4倍更有診斷意義。 【注意事項(xiàng)】 1.血清倍比稀釋?xiě)?yīng)仔細(xì)、準(zhǔn)確加量，勿跳管。 2.觀察結(jié)果時(shí)切勿先振蕩試管，以免破壞試管內(nèi)上清液的透明度及凝集塊的大小和性狀，影響結(jié)果判定。 3.若對(duì)照管出現(xiàn)非特異性凝集，本試驗(yàn)無(wú)效。 4.加診斷菌液時(shí)，應(yīng)從對(duì)照管開(kāi)始由后向前加入，以免影響稀釋血清的濃度。 （二）肥達(dá)試驗(yàn)（大孔反應(yīng)板法）實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、?shí)驗(yàn)原理同肥達(dá)試驗(yàn)傳統(tǒng)試管法。 【實(shí)驗(yàn)器材】 1.吸管、微量加樣器、大孔U型孔反應(yīng)板、振蕩器、20.0g/L亞甲藍(lán)溶液、水浴箱等。 2.診斷菌液、診斷血清、待檢血清等同肥達(dá)試驗(yàn)傳統(tǒng)試管法。 【實(shí)驗(yàn)方法】 1.編號(hào)標(biāo)注  在4排×10孔，孔徑15mm的U型孔反應(yīng)板上分別標(biāo)以TO、TH、PA、PB。 2.倍比稀釋待檢血清  取1支試管加生理鹽水1.44ml，待檢血清0.16ml，先做血清1∶10稀釋?zhuān)蝗缓笕?∶10稀釋血清0.8ml按每孔0.2ml加入第1列各孔中；再取生理鹽水0.8ml加入試管中，使血清1∶20稀釋?zhuān)≡撓♂屟?.8ml按每孔0.2ml加入第2列各孔中；按此法連續(xù)稀釋到第7列的4孔中，則第1列至第7列試管的血清稀釋度依次為1∶10、1∶20、1∶40、1∶80、1∶160、1∶320、1∶640。第8列各孔加生理鹽水0.2ml，不加血清，作為抗原對(duì)照。另設(shè)陽(yáng)性血清對(duì)照。 3.稀釋診斷菌液  取TO、TH、PA、PB診斷菌液（70×108個(gè)/ml），分別用生理鹽水稀釋成10×108個(gè)/ml。每10ml稀釋菌液中加20.0g/L亞甲藍(lán)溶液5μl，便于觀察。 4.加診斷菌液  各排分別加相應(yīng)的染色菌液0.1ml，再補(bǔ)加生理鹽水0.1ml。使各孔液體總量為0.4ml，各孔血清稀釋度增加1倍，各排1～7孔血清最終稀釋度為1∶20～1∶1280。 5.溫育觀察  于振蕩器上混勻1min，反應(yīng)板加蓋玻板，置37℃水浴過(guò)夜，次日觀察結(jié)果。 【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】 陽(yáng)性：液體澄清，藍(lán)色細(xì)顆粒平鋪于整個(gè)孔底。 陰性：藍(lán)色菌體集中于一點(diǎn)，沉積于孔底，與抗原菌液對(duì)照相同。 效價(jià)：以出現(xiàn)50%（2+）凝集，即凝集塊明顯，上清液半透明的血清最高稀釋倍數(shù)為待檢血清的凝集效價(jià)。 參考區(qū)間：與肥達(dá)試驗(yàn)試管法相同。 【注意事項(xiàng)】 1.基本同肥達(dá)試驗(yàn)試管法。 2.每排均需用診斷血清作陽(yáng)性對(duì)照。 實(shí)驗(yàn)二 間接凝集試驗(yàn)間接凝集試驗(yàn)是將可溶性抗原先吸附于一種與免疫無(wú)關(guān)、大小均勻的載體顆粒表面形成致敏顆粒（即免疫微球），再與待檢標(biāo)本中相應(yīng)的抗體相互作用，在適宜的電解質(zhì)參與下，出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的特異性凝集現(xiàn)象。同理也可將抗體吸附于載體顆粒，以檢測(cè)標(biāo)本中相應(yīng)的抗原，此時(shí)稱(chēng)為反向間接凝集試驗(yàn)。間接凝集試驗(yàn)常用于檢測(cè)針對(duì)細(xì)菌、病毒、螺旋體等病原微生物的抗體或某些自身抗體如類(lèi)風(fēng)濕因子、抗核抗體（antinuclearantibody，ANA）等。 現(xiàn)以膠乳凝集試驗(yàn)檢測(cè)類(lèi)風(fēng)濕因子為例加以介紹。 【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?1.掌握膠乳凝集試驗(yàn)檢測(cè)類(lèi)風(fēng)濕因子的操作方法及結(jié)果判定。 2.熟悉間接凝集試驗(yàn)的原理及應(yīng)用。 【實(shí)驗(yàn)原理】 類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者可產(chǎn)生一種抗變性IgG的自身抗體，即類(lèi)風(fēng)濕因子，多為IgM類(lèi)，具有與人變性IgG結(jié)合的能力，利用人變性IgG和聚苯乙烯膠乳顆粒結(jié)合而成的致敏顆粒與患者血清直接反應(yīng)，若血清標(biāo)本中含有RF，則與IgG致敏的膠乳顆粒作用出現(xiàn)凝集，結(jié)果為陽(yáng)性；反之，若血清標(biāo)本中無(wú)RF，則不出現(xiàn)凝集，結(jié)果為陰性，用于類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的輔助診斷。 【實(shí)驗(yàn)器材】 1.抗原 類(lèi)風(fēng)濕膠乳診斷試劑（人變性IgG膠乳顆粒），有商品出售。

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