醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)與遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)教程

內(nèi)容概要

　　《醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)與遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)教程》是醫(yī)學(xué)科學(xué)知識結(jié)構(gòu)的重要組成部分。本教程涵蓋了這兩個(gè)學(xué)科常用實(shí)驗(yàn)方法中與基礎(chǔ)和臨床醫(yī)學(xué)關(guān)系密切的內(nèi)容。上篇對每個(gè)實(shí)驗(yàn)的目的、基本原理、操作流程和實(shí)驗(yàn)結(jié)果做了比較詳細(xì)的介紹，而下篇?jiǎng)t根據(jù)兩個(gè)學(xué)科的進(jìn)展和未來發(fā)展趨勢，結(jié)合自身的教學(xué)和科研體驗(yàn)，分別歸納出兩套可操作性較強(qiáng)，能夠體現(xiàn)學(xué)科間交叉滲透特點(diǎn)的綜合性實(shí)驗(yàn)。因此，本教程既可作為學(xué)生的教科書，也能成為他們?nèi)蘸蟮膶?shí)驗(yàn)手冊。

書籍目錄

第一部分 醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)
　上篇 基本實(shí)驗(yàn)
　　第一章 顯微鏡的構(gòu)造和使用
　　　實(shí)驗(yàn)1-1 普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造和使用方法、細(xì)胞的基本形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察
　　　實(shí)驗(yàn)1-2 倒置相差顯微鏡的構(gòu)造與使用
　　　實(shí)驗(yàn)1-3 顯微鏡測微尺的使用
　　第二章 流式細(xì)胞儀技術(shù)與應(yīng)用
　　　實(shí)驗(yàn)2-1 流式細(xì)胞儀結(jié)構(gòu)原理及應(yīng)用
　　　實(shí)驗(yàn)2-2 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期
　　　實(shí)驗(yàn)2-3 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡
　　　實(shí)驗(yàn)2-4 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞中抗原
　　第三章 細(xì)胞器結(jié)構(gòu)的觀察與分離
　　　實(shí)驗(yàn)3-1 細(xì)胞器的電鏡照片及結(jié)構(gòu)描述
　　　實(shí)驗(yàn)3-2 細(xì)胞器分級分離
　　第四章 細(xì)胞化學(xué)方法和細(xì)胞化學(xué)成分顯示
　　　實(shí)驗(yàn)4-1 細(xì)胞化學(xué)基本理論
　　　實(shí)驗(yàn)4-2 細(xì)胞中骨架蛋白的顯示與細(xì)胞形態(tài)的觀察
　　　實(shí)驗(yàn)4-3 Feulgen法顯示脫氧核糖核酸
　　　實(shí)驗(yàn)4-4 甲基綠一哌洛寧顯示核酸
　　　實(shí)驗(yàn)4-5 蘇木素一伊紅染色顯示細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)
　　第五章 酶細(xì)胞化學(xué)
　　　實(shí)驗(yàn)5-1 酶細(xì)胞化學(xué)的基本原理
　　　實(shí)驗(yàn)5-2 堿性磷酸酶顯示及用途
　　　實(shí)驗(yàn)5-3 聯(lián)苯胺法顯示過氧化物酶及直用
　　　實(shí)驗(yàn)5-4 詹納斯綠顯示活體細(xì)胞線粒體
　　　實(shí)驗(yàn)5-5 通過琥珀酸脫氫酶活性進(jìn)行MTT檢測細(xì)胞相對存活率
　　第六章 免疫化學(xué)技術(shù)
　　　實(shí)驗(yàn)6-1 免疫酶細(xì)胞化學(xué)法檢測髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞中P65蛋白的表達(dá)
　　　實(shí)驗(yàn)6-2 免疫熒光染色顯示髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞中Hesl蛋白的分布
　　　實(shí)驗(yàn)6-3 免疫組織化學(xué)法檢測Hesl在胃癌組織中的表達(dá)與分布
　　第七章 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)
　　　實(shí)驗(yàn)7-1 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理與技術(shù)
　　　實(shí)驗(yàn)7-2 細(xì)胞的原代培養(yǎng)
　　　實(shí)驗(yàn)7-3 傳代細(xì)胞培養(yǎng)
　　　實(shí)驗(yàn)7-4 培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)觀察和計(jì)數(shù)
　　　實(shí)驗(yàn)7-5 細(xì)胞凍存、復(fù)蘇與運(yùn)輸
　　　實(shí)驗(yàn)7-6 細(xì)胞克隆化培養(yǎng)
　　第八章 細(xì)胞行為學(xué)
　　　實(shí)驗(yàn)8-1 細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)
　　　實(shí)驗(yàn)8-2 細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)
　　　實(shí)驗(yàn)8-3 細(xì)胞周期
　　　實(shí)驗(yàn)8-4 小鼠減數(shù)分裂
　　　實(shí)驗(yàn)8-5 細(xì)胞周期特定時(shí)相細(xì)胞同步化方法
　　　實(shí)驗(yàn)8-6 細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的觀察
　　第九章 細(xì)胞衰老和凋亡的檢測
　　　實(shí)驗(yàn)9-1 蘇木素-伊紅染色法顯示凋亡細(xì)包
　　　實(shí)驗(yàn)9-2 Giansa染色法顯示凋亡細(xì)胞
　　　實(shí)驗(yàn)9-3 凋亡細(xì)胞的原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記法(TUNEL法)
　　　實(shí)驗(yàn)9-4 細(xì)胞凋亡的瓊脂糖凝膠電泳檢測
　　　實(shí)驗(yàn)9-5 細(xì)胞衰老的檢測
　　第十章 蛋白質(zhì)的分離與測定
　　　實(shí)驗(yàn)10-1 真核細(xì)胞蛋白質(zhì)提取
　　　實(shí)驗(yàn)10-2 雙縮脲法測定蛋白質(zhì)濃度
　　　實(shí)驗(yàn)10-3 福林一酚法測定蛋白質(zhì)濃度
　　　實(shí)驗(yàn)10-4 考馬斯亮藍(lán)法測定蛋白質(zhì)濃度
　　　實(shí)驗(yàn)10-5 蛋白質(zhì)印跡免疫分析(Westernblotting)
下篇 綜合實(shí)驗(yàn)
　　第十一章 小鼠胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)
　　　實(shí)驗(yàn)11-1 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)
　　　實(shí)驗(yàn)11-2 飼養(yǎng)層細(xì)胞的制備
　　　實(shí)驗(yàn)11-3 小鼠胚胎干細(xì)胞的分離及培養(yǎng)
　　第十二章 IL-6剝奪誘導(dǎo)小鼠B細(xì)胞雜交瘸細(xì)胞株7ID1細(xì)胞凋亡、觀察及檢測
　　　實(shí)驗(yàn)12-1 小鼠B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞株7ID1細(xì)胞復(fù)蘇與傳代培養(yǎng)
　　　實(shí)驗(yàn)12-2 7ID1細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)（IL-6剝奪）及細(xì)胞收集
　　　實(shí)驗(yàn)12-3 IL-6剝奪誘導(dǎo)7TD1細(xì)胞凋亡的形態(tài)特征觀察
　　　實(shí)驗(yàn)12-4 IL-6剝奪誘導(dǎo)7TD1細(xì)胞凋亡的DNA提取及凋亡梯狀帶檢測
　　第十三章 白藜蘆醇誘導(dǎo)髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞分化觀察及相關(guān)基因的檢測
　　　實(shí)驗(yàn)13-1 細(xì)胞的培養(yǎng)與傳代
　　　實(shí)驗(yàn)13-2 白藜蘆醇處理前后細(xì)胞數(shù)量及形態(tài)的觀察以及免疫細(xì)胞化學(xué)染色
　　　實(shí)驗(yàn)13-3 總RNA提取和分化相關(guān)基因突觸素(synaptophysin)的RT-PCR檢測
附錄
　附錄一 試劑濃度的表示方法及其計(jì)算
　附錄二 常用人工合成細(xì)胞培養(yǎng)基的種類、化學(xué)組成及適用細(xì)胞
　附錄三 實(shí)驗(yàn)室常用細(xì)胞系（株）
　附錄四 離心機(jī)轉(zhuǎn)數(shù)與離心力的換算表醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)部分參考文獻(xiàn)
第二部分 醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)
　上篇 基本實(shí)驗(yàn)
　　第一章 常見人類遺傳性狀的分析與遺傳咨詢
　　　實(shí)驗(yàn)1-1 人遺傳病的家系分析與討論
　　　實(shí)驗(yàn)1-2 Bayes法在遺傳咨詢中的具體應(yīng)用
　　　實(shí)驗(yàn)1-3 遺傳度、雜合度、多態(tài)信息量和吻合度測驗(yàn)
　　　實(shí)驗(yàn)1-4 遺傳性疾病遺傳方式的估計(jì)
　　　實(shí)驗(yàn)1-5 多基因遺傳的人類皮膚紋理分析
　　　實(shí)驗(yàn)1-6 人類ABO血型的檢測和遺傳分析
　　　實(shí)驗(yàn)1-7 人類苯硫脲(PTC)嘗味能力的遺傳分析
　　　實(shí)驗(yàn)1-8 人類常見單基因性狀的鑒定與群體遺傳學(xué)分析　　
　　第二章 細(xì)胞遺傳學(xué)相關(guān)的實(shí)驗(yàn)
　　　實(shí)驗(yàn)2-1 人類性染色質(zhì)標(biāo)本的制備與觀察
　　　實(shí)驗(yàn)2-2 外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)與染色體制備
　　　實(shí)驗(yàn)2-3 小鼠骨髓細(xì)胞染色體標(biāo)本的制備與觀察
　　　實(shí)驗(yàn)2-4 染色體G顯帶技術(shù)
　　　實(shí)驗(yàn)2-5 核型分析
　　　實(shí)驗(yàn)2-6 小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核測定
　　　實(shí)驗(yàn)2-7 人類姐妹染色單體交換(SCE)標(biāo)本的制備與觀察（姐妹染色單體技術(shù)）
　　　實(shí)驗(yàn)2-8 熒光原位雜交
　　第三章 分子遺傳學(xué)相關(guān)的實(shí)驗(yàn)
　　　實(shí)驗(yàn)3-1 真核生物組織及細(xì)胞基因組DNA提取
　　　實(shí)驗(yàn)3-2 組織及細(xì)胞中RNA的提取
　　　實(shí)驗(yàn)3-3 DNA與RNA含量測定
　　　實(shí)驗(yàn)3-4 聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(PCR)體外擴(kuò)增DNA片段
　　　實(shí)驗(yàn)3-5 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Rr-PCR)
　　　實(shí)驗(yàn)3-6 實(shí)時(shí)定量PCR(real-time-PCR)
　　　實(shí)驗(yàn)3-7 DNA序列測定
　　　實(shí)驗(yàn)3-8 質(zhì)粒DNA提取
　　　實(shí)驗(yàn)3-9 限制性核酸內(nèi)切酶對DNA進(jìn)行酶切
　　　實(shí)驗(yàn)3-10 電泳分離酶切DNA片段
　　　實(shí)驗(yàn)3-11 DNA片段的回收與純化
　　　實(shí)驗(yàn)3-12 目的基因與載體片段的連接
　　　實(shí)驗(yàn)3-13 感受態(tài)細(xì)胞的制備
　　　實(shí)驗(yàn)3-14 重組DNA的轉(zhuǎn)化
　　　實(shí)驗(yàn)3-15 重組質(zhì)粒的篩選
　　　實(shí)驗(yàn)3-16 核酸分子雜交技術(shù)
　下篇 綜合實(shí)驗(yàn)
　　第四章 基因多態(tài)性分析
　　　第一節(jié) 概述
　　　第二節(jié) CYPIA1基因多態(tài)性與胃癌易感性的相關(guān)性研究
　　第五章 PCR-SSCP與基因點(diǎn)突變檢測
　　　第一節(jié) 概述
　　　第二節(jié) PCR-SSCP方法檢測腫瘤細(xì)胞p53基因點(diǎn)突變
　　第六章 腫瘤細(xì)胞中基因印記狀態(tài)的檢測方法
　　　第一節(jié) 概述
　　　第二節(jié) 胃癌組織中胰島素樣生長因子-2基因印記缺失的檢測
　　第七章 腫瘤組織中p16抑癌基因表達(dá)檢測
　　　第一節(jié) 概述
　　　第二節(jié) RT-PCR方法檢測胃癌組織中p16抑癌基因表達(dá)情況
　　第八章 腫瘤細(xì)胞中抑癌基因異常高甲基化檢測與分析
　　　第一節(jié) 概述
　　　第二節(jié) 胃癌細(xì)胞中抑癌基因p16啟動(dòng)子區(qū)異常甲基化檢測
　　附錄
　　　附錄一 SAGE技術(shù)
　　　附錄二 基因芯片技術(shù)
　　　附錄三 RNAi技術(shù)
　　　附錄四 MicroRNA技術(shù)
　　　附錄五 DNA甲基化檢測技術(shù)
　　　附錄六 生物信息學(xué)研究方法醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)部分參考文獻(xiàn)

章節(jié)摘錄

第一部分　醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué) 上篇　基本實(shí)驗(yàn) 第一章　顯微鏡的構(gòu)造和使用 實(shí)驗(yàn)1-1　普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造和使用方法、細(xì)胞的基本形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察 【相關(guān)背景】 顯微鏡是用來觀察、記錄和研究經(jīng)過制片技術(shù)處理后被檢物體細(xì)微結(jié)構(gòu)的最主要的光學(xué)精密儀器。在細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域中應(yīng)用最為廣泛。這對微觀世界的探索及理論的研究起著極其重要的作用。用于普通光學(xué)顯微鏡觀察的生物樣品必須經(jīng)過一系列的組織處理并制成1～10μm的切片。普通光學(xué)顯微鏡可以觀察染色的生物標(biāo)本的結(jié)構(gòu)，主要是因?yàn)楣饩€通過染色標(biāo)本時(shí)其顏色（光波的波長）和亮度（光波的振幅）發(fā)生變化，人的眼睛才能觀察到。 近年來，隨著多種現(xiàn)代生物學(xué)技術(shù)與光鏡技術(shù)的結(jié)合，使光學(xué)顯微鏡展示出更新的活力。目前光學(xué)顯微鏡已發(fā)展成多種類型，用于各類不同的研究目的。在細(xì)胞生物學(xué)中常用的有普通光學(xué)顯微鏡、熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、相差顯微鏡，以及暗視野顯微鏡和微分干涉差顯微鏡。 【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?（1）掌握低倍鏡和高倍鏡的使用方法，初步學(xué)會油鏡的使用。 （2）掌握臨時(shí)制片和生物繪圖方法。 （3）熟悉光學(xué)顯微鏡下細(xì)胞的基本形態(tài)結(jié)構(gòu)。 （4）熟悉普通光學(xué)顯微鏡的主要構(gòu)造。 【實(shí)驗(yàn)原理】 光學(xué)顯微鏡是用于觀察微小生物及細(xì)胞結(jié)構(gòu)的常用儀器。它利用光學(xué)原理，把人眼所不能分辨的微小物體放大成像，將兩個(gè)正透鏡恰當(dāng)?shù)卣{(diào)節(jié)組合，放大標(biāo)本，以供觀察。光鏡的最大分辨率為0.2μm。 【實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備】 1.實(shí)驗(yàn)對象　頭發(fā)交叉裝片，字母裝片，口腔黏膜上皮細(xì)胞，西紅柿。 2.實(shí)驗(yàn)試劑　生理鹽水溶液，0.1%亞甲基藍(lán)溶液，蒸餾水，二甲苯，香柏油。 3.實(shí)驗(yàn)儀器　普通光學(xué)顯微鏡，載玻片，蓋玻片，鑷子，消毒牙簽，燒杯，吸管，吸水紙，擦鏡紙，紗布，鏡油瓶或二室瓶。 【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法】 普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造及使用 普通光學(xué)顯微鏡（簡稱光鏡）是最常使用的顯微鏡，主要由三部分組成：聚光鏡、物鏡和目鏡（圖1-1-1）。光鏡采用可見光作光源，分辨率為0.2μm，放大倍率為1000倍，其他幾種顯微鏡都是在此基礎(chǔ)上發(fā)展起來的。 1.機(jī)械部分 （1）鏡座：鏡座是顯微鏡的基座，位于最底部。呈長方形或馬蹄形，用以支持鏡體和穩(wěn)固顯微鏡。在鏡座上固定有照明部分的反光鏡或電光源。 （2）鏡柱：鏡柱是鏡座上方垂直的柱形粗大部分，上端與彎曲的鏡臂相連。在其兩側(cè)有突出圓形螺旋，為對焦粗調(diào)節(jié)器和細(xì)調(diào)節(jié)器。 （3）鏡臂：緊接鏡柱頂部并向前彎曲，上端與鏡筒相連，也是取用顯微鏡時(shí)手握之處。 （4）鏡筒：鏡筒是連于鏡臂前端或上方的結(jié)構(gòu)，呈圓筒狀或矩形，頂部裝有目鏡（一個(gè)或兩個(gè)）。 （5）鏡臺（載物臺）：鏡臺與鏡柱相連，為一塊方形（或圓形）平板，用以放置玻片標(biāo)本。 鏡臺中央有一圓形通光孔，由反光鏡反射來的光線經(jīng)此孔射向標(biāo)本。鏡臺上有一可動(dòng)的弧形彈簧夾，用以固定玻片標(biāo)本。 （6）推進(jìn)器：推進(jìn)器位于鏡臺后部。在鏡臺左下方有上下兩個(gè)同軸螺旋，轉(zhuǎn)動(dòng)時(shí)，可使推進(jìn)器前后或左右移動(dòng)。 位于推進(jìn)器后方與側(cè)面上有縱橫游標(biāo)尺（圖1-1-2），用以測量標(biāo)本在視野中的位置和長度。它由主標(biāo)尺m和副標(biāo)尺n組成。主標(biāo)尺刻有一毫米的分度；副標(biāo)尺刻有9/10毫米的分度，讀數(shù)為0.1毫米。使用時(shí)首先看副標(biāo)尺“0”的位置，然后看與主標(biāo)尺相重疊的一致點(diǎn)，如圖1-1-2所示，副標(biāo)尺“0”的位置在12與13毫米之間，而副標(biāo)尺的8與主標(biāo)尺的20完全重合在一起，則得知讀數(shù)為12.8毫米。 （7）調(diào)節(jié)器：調(diào)節(jié)器是裝在鏡柱上的大小兩種螺旋，轉(zhuǎn)動(dòng)時(shí)可使鏡臺上下移動(dòng)，以調(diào)節(jié)物鏡和標(biāo)本之間的距離，即調(diào)節(jié)焦距。 轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器時(shí)鏡臺升降幅度較大，能迅速調(diào)節(jié)物鏡與標(biāo)本間的距離，使物像呈現(xiàn)于視野中。轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)調(diào)節(jié)器時(shí)鏡臺升降幅度小，一般在用粗調(diào)節(jié)器調(diào)焦的基礎(chǔ)上或在使用高倍鏡時(shí)，用它作比較精確的調(diào)節(jié)，從而得到完全清晰的物像，并能觀察標(biāo)本不同層次和不同深度的結(jié)構(gòu)。在細(xì)調(diào)節(jié)器上有刻度，用以測量被觀察物體的厚度，在OLYMPUS-CHC型顯微鏡的細(xì)調(diào)節(jié)器上有180個(gè)刻度，一刻度為2.5微米。 在左側(cè)粗調(diào)節(jié)器與鏡柱之間有一窄環(huán)，稱為松緊調(diào)節(jié)環(huán)，可控制調(diào)節(jié)器的松緊（松緊已調(diào)好，勿動(dòng)）。在右側(cè)粗調(diào)節(jié)器與鏡柱之間有一具小柄的窄環(huán)，此柄為粗調(diào)限位柄，可使粗調(diào)節(jié)器限定鏡臺只能在一定范圍內(nèi)升降，此環(huán)已鎖好，初學(xué)者勿動(dòng)。 （8）旋轉(zhuǎn)盤（物鏡轉(zhuǎn)換器）：連于鏡筒下端，為一凸形圓盤，可以自由轉(zhuǎn)動(dòng)，其下方有3～4個(gè)螺旋口，可按順序裝上不同放大倍數(shù)的物鏡。當(dāng)物鏡轉(zhuǎn)到工作位時(shí)（即與光軸合軸），即發(fā)出“咔”的聲音，否則無法觀察標(biāo)本（初學(xué)者勿隨意拆卸物鏡）。 2.照明部分　在鏡臺下方裝有一套照明裝置，由反光鏡或電光源、聚光器、光闌組成。 （1）反光鏡：反光鏡是裝在鏡座上的小圓鏡。有平、凹兩面，可向任意方向轉(zhuǎn)動(dòng)。用以把光源的光線反射入聚光器中，再經(jīng)過通光孔照明標(biāo)本。反光鏡的凹面鏡聚光力強(qiáng)，適于光線較弱時(shí)使用，在光線較強(qiáng)時(shí)，宜選用平面鏡。 （2）聚光器：位于鏡臺下方，由一組透鏡組成，可將光線匯集成束，以增強(qiáng)照明作用。會聚后的光線經(jīng)通光孔射至標(biāo)本上。在聚光鏡的側(cè)下方（右或左側(cè)）有一小螺旋，轉(zhuǎn)動(dòng)時(shí)可升降聚光器。上升時(shí)，光線增強(qiáng)；下降時(shí)則光線減弱。 （3）光闌（光圈）：位于聚光器下方，由一組金屬薄片組成。其側(cè)面有一小黑柄，移動(dòng)時(shí)可使光闌開閉。當(dāng)光闌開大，則光線較強(qiáng)，適于觀察色深標(biāo)本；光闌縮小，則光線較弱，適于觀察透明（或無色）的標(biāo)本。 光源：可以是天然光源或人工光源，隨情況而定。 3.光學(xué)部分　由物鏡和目鏡組成。 （1）物鏡：物鏡是決定顯微鏡質(zhì)量、分辨力和放大倍數(shù)最關(guān)鍵的光學(xué)部分。物鏡鏡筒上刻有主要性能參數(shù)，以放大倍數(shù)不同，分述如下： （2）低倍鏡：鏡筒最短，鏡面直徑最大。筒上刻有10或10×字樣，即放大10倍。另刻有0.25字樣為數(shù)值孔徑（簡寫為N.A.），可反映該物鏡的分辨力之大小，數(shù)值越大，表示分辨力越高。 （3）高倍鏡：鏡筒較低倍鏡鏡筒長，鏡面直徑較小。筒上刻有40或40×字樣，即放大40倍。尚刻有0.65及0.17字樣，分別表示其N.A.及物鏡要求的蓋玻片厚度。 （4）油浸鏡：鏡筒最長，鏡面直徑最小。筒上刻有100或100×字樣，即放大100倍。尚刻有HL表示油浸鏡；1.30為N.A.值。 （5）目鏡：是僅次于物鏡的光學(xué)部件，它將物鏡放大形成的中間像進(jìn)一步放大，便于觀察，但它并不能提高顯微鏡的分辨力。目鏡位于鏡筒上端，可裝有一個(gè)目鏡（單目鏡筒）或兩個(gè)目鏡（雙目鏡筒），其上刻有10×或15×等字樣，表示其放大倍數(shù)。目鏡通常由兩個(gè)透鏡組成，上面與眼接觸的為接目透鏡；下面的叫視野透鏡（在鏡筒內(nèi)，可不觀察）。 顯微鏡的總放大倍數(shù)的計(jì)算是目鏡放大倍數(shù)與物鏡放大倍數(shù)之積。如目鏡為10×，物鏡為40，則物體放大倍數(shù)為400倍。 顯微鏡的使用方法 1.低倍鏡的使用 （1）顯微鏡的拿取與安放：使用時(shí)，打開鏡箱，右手握住鏡臂，左手托住鏡座，保持平穩(wěn)狀態(tài)輕輕放在實(shí)驗(yàn)臺上。如使用的為雙目鏡鏡筒的顯微鏡應(yīng)放在觀察者的正前方；如使用的為單目鏡鏡筒的顯微鏡時(shí)，應(yīng)放在觀察者的左前方。顯微鏡距桌緣約3～6cm。調(diào)節(jié)凳子的高度，使眼與目鏡接近，以便觀察并保持姿勢端正。 （2）對光：轉(zhuǎn)動(dòng)旋轉(zhuǎn)盤，使低倍鏡對準(zhǔn)鏡臺上的通光孔，當(dāng)聽到“咔”的輕微碰擊聲時(shí)，說明目鏡與物鏡的光軸一致。打開光闌，上升聚光器，兩眼睜開，經(jīng)目鏡觀察，轉(zhuǎn)動(dòng)反光鏡，使它朝向光源，直至目鏡中所見視野范圍內(nèi)的光線均勻，亮度適宜為止。 （3）置片：取頭發(fā)或字母制片，使有蓋片的一面朝上，放在鏡臺上，用彈簧夾夾?。o蓋片的標(biāo)本應(yīng)使有材料的一面朝上）。然后用左手轉(zhuǎn)動(dòng)推動(dòng)器螺旋，將標(biāo)本移至通光孔中央。 （4）調(diào)焦：俯首側(cè)視低倍鏡，轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器使鏡臺上升至距標(biāo)本0.5cm處，根據(jù)顯微鏡類型各取下述方法繼續(xù)操作： 1）使用單目鏡筒：用左眼從目鏡中觀察視野，同時(shí)右眼要張開。再慢慢轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器，使鏡臺慢慢下降，直到視野中觀察物像清晰為止。 2）使用雙目鏡筒：首先調(diào)節(jié)雙目鏡間的距離，使之與觀察者的瞳間距一致。調(diào)節(jié)時(shí)分別用雙手的拇、食指把住目鏡下黑色橫板（雙目鏡筒間調(diào)節(jié)座）的邊緣，向外拉或向內(nèi)推，此時(shí)雙眼在兩目鏡上觀察，直至看到一個(gè)大而明亮的視野為止，讀出目鏡筒間距數(shù)值。然后，旋轉(zhuǎn)右鏡筒長度補(bǔ)償環(huán)的刻度值，使與雙目鏡筒間距數(shù)值一致并對準(zhǔn)環(huán)下外側(cè)的白色刻度線。再轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器，使鏡臺慢慢下降，直到右眼所觀察的物像清晰。隨后再旋轉(zhuǎn)左鏡筒長度補(bǔ)償環(huán)，至物像清晰為止。通過以上操作，左右目鏡的焦點(diǎn)已對好，此鏡筒長就能保持物鏡的放大倍數(shù)和同等焦距正確，并調(diào)節(jié)雙目鏡筒的距離和補(bǔ)償觀察者兩眼的視度差。在操作時(shí)必須養(yǎng)成兩眼張開，兩手并用（右手操作調(diào)節(jié)器，左手操縱推進(jìn)器）的習(xí)慣。 2.高倍鏡的使用　先從低倍鏡下看清物像（如字母或頭發(fā)的交叉點(diǎn)）并移到視野中央，然后可直接換用高倍鏡觀察。轉(zhuǎn)換高倍鏡時(shí)速度要慢，并從側(cè)面觀察，防止高倍鏡碰撞玻片！轉(zhuǎn)換好高倍鏡后，從目鏡觀察，慢慢轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)調(diào)節(jié)器（切勿用粗調(diào)節(jié)器，以防壓碎玻片、損壞鏡頭），直至物像清晰為止。觀察時(shí)如光線較弱，可調(diào)節(jié)聚光器等，使光線適宜。如在視野內(nèi)找不到物像，說明觀察的目的物不在視野中央，或焦距不對，必須從低倍鏡開始按上述過程重新操作。 3.油浸鏡的使用　把在高倍鏡下觀察的目的物，移至視野中央后，移開高倍鏡，在蓋玻片上滴一滴香柏油，換用油浸鏡并使鏡頭浸在“油”中。觀察時(shí)，只需略微轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)調(diào)節(jié)器，就能看清物像。觀察完畢后，轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器，使鏡臺下降，取下制片，在一塊擦鏡紙上滴加二甲苯，擦凈鏡頭上的香柏油，再另換一塊干凈擦鏡紙?jiān)倏烈淮?。制片也按上法擦凈?細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察 1.制作并觀察人的口腔上皮細(xì)胞的臨時(shí)裝片 （1）在潔凈的載玻片中央，滴一滴生理鹽水。 （2）用消毒牙簽的一端，在漱凈的口腔側(cè)壁上輕輕地刮幾下。 （3）把牙簽上附有碎屑的一端，放在載玻片上的生理鹽水滴中涂勻。 （4）用鑷子夾起潔凈的蓋玻片，將它的一邊先接觸載玻片上的生理鹽水滴，然后，輕輕地蓋在水滴上。然后在蓋片的一側(cè)加一滴0.1%亞甲基藍(lán)染液，在蓋片的另一側(cè)用吸水紙吸取，染色后細(xì)胞核被染成深藍(lán)色，細(xì)胞質(zhì)淺藍(lán)色。 （5）用顯微鏡觀察細(xì)胞形狀，細(xì)胞呈扁平鱗狀。 2.西紅柿果肉細(xì)胞涂片的制作　西紅柿果肉細(xì)胞涂片制作似人口腔上皮細(xì)胞，但將生理鹽水換成蒸餾水，且不必染色就可直接觀察。細(xì)胞大小和形狀如何？ 【注意事項(xiàng)】 顯微鏡是貴重精密儀器，要做到正確而熟練地使用，應(yīng)注意如下事項(xiàng)： 1.操作時(shí)注意事項(xiàng) （1）在放置玻片標(biāo)本時(shí)，應(yīng)特別注意有蓋片的一面朝上，切勿反放，反放對觀察低倍鏡影響不大，但當(dāng)換用高倍鏡或油浸鏡時(shí)，不但在視野內(nèi)找不到物像，而且易損壞物鏡上的透鏡及標(biāo)本。 （2）在使用雙目鏡筒觀察時(shí)，首先要調(diào)好雙目鏡間距與間距一致，并調(diào)好鏡筒長度補(bǔ)償環(huán)的數(shù)值刻度。 （3）觀察任何標(biāo)本時(shí)，應(yīng)先用低倍鏡。如果用高倍鏡觀察，也要先在低倍鏡下找到物像，并將所要詳細(xì)觀察的部分移到低倍鏡視野中央，然后再轉(zhuǎn)換高倍鏡。如果要用油浸鏡，也要先用低倍鏡，然后用高倍鏡，最后使用油浸鏡。 （4）用低倍鏡觀察色深的標(biāo)本適于用較強(qiáng)的光線；觀察透明（或無色）的標(biāo)本，適于用較弱的光線。 （5）觀察時(shí)要兩眼同時(shí)張開，兩手并用。 2.顯微鏡的維護(hù) （1）按要求拿取顯微鏡，切勿單手提著行走，以免碰壞或使部件跌落。 （2）用前要檢查，發(fā)現(xiàn)問題，立即報(bào)告老師。 （3）不得隨意拆卸任何部件和轉(zhuǎn)動(dòng)已閉鎖好的結(jié)構(gòu)。 （4）光學(xué)部分和照明部分要用擦鏡紙揩擦，不得手摸或用它物揩擦；機(jī)械部分用紗布揩擦。 （5）不得將臨時(shí)制片的水、化學(xué)試劑和藥品沾污鏡頭和鏡臺。 （6）當(dāng)離開座位（觀察示教鏡或進(jìn)行其他操作）時(shí)，要下降鏡臺，旋轉(zhuǎn)物鏡使之離開通光孔，并使三個(gè)物鏡均朝向前方。 （7）使用完畢，應(yīng)下降鏡臺，取下玻片標(biāo)本，旋開物鏡（同離開座位時(shí)相同），再使鏡臺上升，最后填寫使用登記本，把顯微鏡放回原處。 【作業(yè)與思考題】 （1）繪出你所觀察到的人口腔上皮細(xì)胞和西紅柿果肉細(xì)胞圖，指出各部分的名稱。 （2）為什么用高倍鏡或油浸鏡時(shí)，必須從低倍鏡開始觀察？并把目的物移至視野中央？ 附錄　試劑配制 生理鹽水溶液：氯化鈉9克，純水適量，先用純水少量溶解，然后再加水至1000毫升，即配制成每100 毫升溶液中含0.9克氯化鈉的生理鹽水溶液。 0.1%亞甲基藍(lán)染液：0.1g亞甲基藍(lán)溶入100ml蒸餾水即可。 實(shí)驗(yàn)1-2　倒置相差顯微鏡的構(gòu)造與使用 【相關(guān)背景】 相差顯微鏡是一種將光線通過透明標(biāo)本細(xì)節(jié)時(shí)所產(chǎn)生的光程差（即相位差）轉(zhuǎn)化為光強(qiáng)差的特種顯微鏡。光波有振幅（亮度）、波長（顏色）及相位（指在某一時(shí)間上光的波動(dòng)所能達(dá)到的位置）的不同。當(dāng)光通過物體時(shí)，如波長和振幅發(fā)生變化，人們的眼睛才能觀察到，這就是普通顯微鏡下能夠觀察到染色標(biāo)本的道理。而活細(xì)胞和未經(jīng)染色的生物標(biāo)本，因細(xì)胞各部微細(xì)結(jié)構(gòu)的折射率和厚度略有不同，光波通過時(shí)，波長和振幅并不發(fā)生變化，僅相位有變化（相位發(fā)生的差異即相差），而這種微小的變化，人眼是無法加以鑒別的，故在普通顯微鏡下難以觀察到。相差顯微鏡成像原理即當(dāng)同一種光通過細(xì)胞時(shí)，由于細(xì)胞不同部分對光的折射率不同，因此，通過細(xì)胞的光線和未通過細(xì)胞的光線便可以產(chǎn)生相位差。再 通過特定的相差板使之發(fā)生干涉，并且利用光的衍射和干涉現(xiàn)象，把相差變成振幅差（明暗差），同時(shí)它還吸收部分直射光線，以增大其明暗的反差。因此可用以觀察活細(xì)胞或未染色標(biāo)本。倒置相差顯微鏡，其照明系統(tǒng)位于鏡體上方，而物鏡和目鏡則位于下部。這樣在集光器和載物臺之間有較大的工作距離，可以放置培養(yǎng)皿、細(xì)胞培養(yǎng)瓶等容器，輔助以相差的光學(xué)系統(tǒng)，可以很方便地對培養(yǎng)中的細(xì)胞進(jìn)行觀察。 【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?（1）掌握倒置相差顯微鏡的基本操作步驟。 （2）了解倒置相差顯微鏡的特殊組件、位置及觀察活細(xì)胞的原理。 （3）了解腫瘤細(xì)胞的一般形態(tài)和生長狀態(tài)。 【實(shí)驗(yàn)原理】 倒置相差顯微鏡是相差顯微鏡和倒置顯微鏡的結(jié)合，它既具有倒置顯微鏡的倒置觀察方式，同時(shí)，成像原理則與相差顯微鏡成像原理相一致。能直接對培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶的標(biāo)本進(jìn)行顯微觀察。物鏡在下，聚光器在上，被觀察樣品置于位于上方的聚光器之下，聚光器具有遠(yuǎn)大于物鏡的工作距離。因此，適應(yīng)于培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中樣品的觀察。 【實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備】 1.實(shí)驗(yàn)對象　培養(yǎng)皿（瓶）中的活細(xì)胞。 2.實(shí)驗(yàn)儀器　倒置相差顯微鏡。 【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法】 1.倒置相差顯微鏡的特殊組件　相差顯微鏡與普通光學(xué)顯微鏡基本結(jié)構(gòu)相同，相差顯微鏡由相差聚光器和相差接物鏡兩個(gè)主要部分組成。它與普通光鏡相比多了兩個(gè)部件，一個(gè)是在聚光器上增加一個(gè)環(huán)形光闌，使透過聚光器的光線形成空心光錐、聚焦到標(biāo)本上。 另一個(gè)是在物鏡的后焦面增加一個(gè)相板，相板有一個(gè)環(huán)形區(qū)，其大小適好通過環(huán)形光闌的直射光，相板各區(qū)渡以不同物質(zhì)，使通過環(huán)形區(qū)的光比通過相板其他部位的光超前或滯后

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《醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)與遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)教程》中國科學(xué)院教材建設(shè)專家委員會規(guī)劃教材?全國高等醫(yī)藥院校規(guī)劃教材之一。

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