離子通道研究方法精要

內(nèi)容概要

離子通道領(lǐng)域研究熱點(diǎn)的快速增長，證明其在維持生命狀態(tài)過程中起到的基礎(chǔ)性作用。分子生物學(xué)和物理學(xué)是離子通道研究中極為重要的兩種方法，本書基于這一角度選取了部分有代表性的研究方法。章節(jié)作者在闡述某種研究方法時，使用了大量的圖表并與其他方法進(jìn)行比較，提供一些竅門和捷徑使其可以適用于其他研究體系。本書語言簡明易懂，適合初涉離子通道領(lǐng)域的研究者，對有經(jīng)驗(yàn)的研究人員也極具參考價(jià)值。

作者簡介

Director,Office of Research Advocacy (OHSU)
Senior Scientist,Divisions of Reproductive Sciences and
Neuroscience (ONPRC)
Professor,Departments of Pharmacology and Physiology,Cell and
Developmental Biology,and Obstetrics and Gynecology (OHSU)
Beaverton,Oregon

書籍目錄

撰稿人
前言
第一部分 組裝
 1.離子通道的組裝
 Ⅰ.引言
 Ⅱ.策略和方法
 參考文獻(xiàn)
第二部分 遺傳學(xué)
 2.通過酵母雙雜交系統(tǒng)鑒定離子通道關(guān)聯(lián)的蛋白質(zhì)
 Ⅰ.引言
 Ⅱ.酵母雙雜交系統(tǒng)的原理
 Ⅲ.材料和方法
 Ⅳ.酵母雙雜交系統(tǒng)的局限、前景和展望
 附錄:溶液
 參考文獻(xiàn)
第三部分 電生理學(xué)
 3.囊性纖維化跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)節(jié)因子氯離子通道的膜片鉗研究
 Ⅰ.引言
 Ⅱ.表達(dá)體系的選擇
 Ⅲ.膜片鉗技術(shù)
 Ⅳ.CFTR通道的通透性
 Ⅴ.CFTR氯離子通道的調(diào)控
Ⅵ.DRSCAN:一種用于長時間記錄分析的兼容性程序
 附錄
 參考文獻(xiàn)
 4.秀麗隱桿線蟲(C. elegans)神經(jīng)元的緊密封接全細(xì)胞膜片鉗
 Ⅰ.引言
 Ⅱ.概述
 Ⅲ.用于原位電生理的C.
elegans的制備
 Ⅳ.亞微米開度的膜片鉗的構(gòu)成
 Ⅴ.溶液
 Ⅵ.膜片鉗設(shè)置
 Ⅶ.GFP標(biāo)記的神經(jīng)元記錄
 Ⅷ.緊密封接的全細(xì)胞記錄
 Ⅸ.小細(xì)胞膜片鉗記錄的闡釋
 Ⅹ.電壓的空間控制
 Ⅺ.前景
 Ⅻ.總結(jié)
 參考文獻(xiàn)
 5.門控電流
 Ⅰ.引言
 Ⅱ.門控電流的研究
 Ⅲ.單通道電荷
 Ⅳ.檢測中的問題
 Ⅴ.分離中的問題
 Ⅵ.電壓鉗
 Ⅶ.記錄步驟
 Ⅷ.門控電流的記錄
 Ⅸ.基本門控事件
 Ⅹ.頻域門控電流的記錄
 參考文獻(xiàn)
 6.離子通道通透性質(zhì)的確定
 Ⅰ.引言
 Ⅱ.單離子電勢
 Ⅲ.離子通道的選擇性
 Ⅳ.離子孔道的分類
 Ⅴ.孔道阻斷研究
 Ⅵ.孔道占有情況的確定
 Ⅶ.結(jié)論
 參考文獻(xiàn)
第四部分 表達(dá)體系
 7.通過塞姆利基森林病毒(SFV)和桿狀病毒表達(dá)配體門控的離子通道
 Ⅰ.引言
 Ⅱ.病毒DNA或RNA的生成
 Ⅲ.宿主細(xì)胞的選擇和培養(yǎng)
 Ⅳ.病毒的擴(kuò)增和滴定
 Ⅴ.實(shí)驗(yàn)參數(shù)的優(yōu)化
Ⅵ.桿狀病毒和SFV表達(dá)離子通道的應(yīng)用
 Ⅶ.結(jié)論
 參考文獻(xiàn)
 8.由重組腺病毒介導(dǎo)的編碼離子通道和突觸功能相關(guān)分子的基因在神經(jīng)系統(tǒng)中的表達(dá)
 Ⅰ.引言
 Ⅱ.重組腺病毒的準(zhǔn)備
 Ⅲ.技術(shù)
 Ⅳ.鉀離子通道的表達(dá)
Ⅴ.腺病毒在急性海馬腦片生理學(xué)中的應(yīng)用
 Ⅵ.未來的方向
 參考文獻(xiàn)
 9.異源離子通道的瞬時表達(dá)
 Ⅰ.更新
 Ⅱ.引言
 Ⅲ.方法
 Ⅳ.結(jié)果
 Ⅴ.總結(jié)
 參考文獻(xiàn)
第五部分 模型模擬
 10.離子通道的電腦模擬和建模
 Ⅰ.引言
 Ⅱ.基礎(chǔ)統(tǒng)計(jì)方法
 Ⅲ.勢能
Ⅳ.非線性Poisson-Boltzmann方程
 Ⅴ.模擬步驟總結(jié)
 參考文獻(xiàn)
第六部分 物理
 11.測定離子通道活性的熒光技術(shù)
 Ⅰ.引言
 Ⅱ.實(shí)驗(yàn)步驟
 Ⅲ.藥理驗(yàn)證試驗(yàn)
 Ⅳ.鈣離子高度應(yīng)答性離子通道
 Ⅴ.鈣離子中度應(yīng)答性離子通道
 Ⅵ.鈣離子低度應(yīng)答性離子通道
Ⅶ.基于熒光染料測定離子通道活性的鈣離子濃度試驗(yàn)的局限
 Ⅷ.基于熒光染料鈣離子濃度試驗(yàn)的優(yōu)勢
 參考文獻(xiàn)
 12.分析離子通道結(jié)構(gòu)和功能的配體結(jié)合方法
 Ⅰ.修改文稿介紹
 Ⅱ.引言
 Ⅲ.方法比較
 Ⅳ.方法
 Ⅴ.熒光配體結(jié)合試驗(yàn)
 Ⅵ.配體結(jié)合分析
 Ⅶ.熱動力循環(huán)分析
 參考文獻(xiàn)
 13.二維結(jié)晶、冷凍電鏡和成像分析決定的膜蛋白三維結(jié)構(gòu)
 Ⅰ.引言
Ⅱ.電子冷凍晶體學(xué)的膜蛋白結(jié)構(gòu)分析的步驟
 Ⅲ.圖譜闡釋
 Ⅳ.結(jié)論
 參考文獻(xiàn)
 14.毛細(xì)管電泳的電壓鉗生物感受器
 Ⅰ.引言
 Ⅱ.毛細(xì)管電泳
 Ⅲ.斷裂電泳毛細(xì)管的構(gòu)成
 Ⅳ.細(xì)胞制備
 Ⅴ.毛細(xì)管電泳膜片鉗記錄
 Ⅵ.雙電極電壓鉗記錄
 Ⅶ.總結(jié)
 參考文獻(xiàn)
 15.離子通道作為監(jiān)控脂雙層與膜蛋白相互作用的工具:短桿菌肽作為分子力的傳遞者
 Ⅰ.近期發(fā)展
 Ⅱ.引言
 Ⅲ.蛋白質(zhì)構(gòu)象改變和脂雙層擾動
 Ⅳ.膜擾動和通道功能
 Ⅴ.膜變形的能量
 Ⅵ.載體與通道報(bào)告蛋白的選擇
 Ⅶ.分子力傳遞者
Ⅷ.測定ΔG<sup>(I→II)</sup><sub>bilayer</sub>和現(xiàn)象的彈力常數(shù)
 Ⅸ.結(jié)論
 參考文獻(xiàn)
第七部分 純化和重組
 16.上皮囊性纖維化跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)節(jié)因子氯離子通道的純化和重構(gòu)
 Ⅰ.更新
 Ⅱ.引言
Ⅲ.CFTR在Sf9-桿狀病毒系統(tǒng)中的表達(dá)
 Ⅳ.CFTR的溶解和純化
 Ⅴ.CFTR的重組
 Ⅵ.重組CFTR通道功能特征的估測
 參考文獻(xiàn)
 17.天然和克隆的通道在平面脂雙層的重組
 Ⅰ.更新
 Ⅱ.引言和概述
Ⅲ.大鼠肌肉T-小管細(xì)胞膜:一種K<sup>+</sup><sub>ca</sub>通道和Na<sup>+</sup><sub>v</sub>通道的可靠資源
Ⅳ.天然組織中各種類型離子通道的制備和重組
Ⅴ.克隆和異源表達(dá)的通道重組到平面脂雙層的方法
 參考文獻(xiàn)
第八部分 第二信使和生化方法
 18.配體門控離子通道的蛋白質(zhì)磷酸化
 Ⅰ.引言
Ⅱ.配體門控離子通道磷酸化的生化性質(zhì)分析
 Ⅲ.配體門控離子通道磷酸化的功能作用
 Ⅳ.結(jié)論
 參考文獻(xiàn)
 19.離子通道關(guān)聯(lián)蛋白的分析
 Ⅰ.引言
 Ⅱ.總體考慮
 Ⅲ.重組蛋白的體外結(jié)合
 Ⅳ.全長蛋白質(zhì)在異源細(xì)胞中的整合
 Ⅴ.離子通道和關(guān)聯(lián)蛋白在體內(nèi)的共定位
Ⅵ.天然組織中離子通道和關(guān)聯(lián)蛋白的免疫共沉淀
 Ⅶ.結(jié)論
 參考文獻(xiàn)
 20.離子通道的第二信使調(diào)控/植物膜片鉗
 Ⅰ.更新
 Ⅱ.引言
 Ⅲ.暴露膜
 Ⅳ.植物細(xì)胞與動物細(xì)胞膜片鉗的對比
 Ⅴ.離子通道的第二信使調(diào)控
 Ⅵ.結(jié)論性評語
 附錄
 參考文獻(xiàn)
第九部分 特殊離子通道
 21.ATP敏感性鉀離子通道
 Ⅰ.引言
 Ⅱ.藥物合成
 Ⅲ.組織培養(yǎng)
 Ⅳ.轉(zhuǎn)染操作
 Ⅴ.銣外流檢測
 Ⅵ.膜的分離
 Ⅶ.光標(biāo)操作
 Ⅷ.受體溶解
 Ⅸ.SUR1的部分純化
 Ⅹ.額外純化步驟
 Ⅺ.沉降
 Ⅻ.結(jié)合檢測
 參考文獻(xiàn)
 22.研究機(jī)械力門控通道的簡化快速壓力鉗技術(shù)
 Ⅰ.引言
 Ⅱ.簡化壓力鉗的機(jī)械排布
 Ⅲ.壓力鉗的電子控制
 Ⅳ.構(gòu)建的一些實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)
 附錄
 參考文獻(xiàn)
 23.抑制性甘氨酸受體的異源表達(dá)和純化
 Ⅰ.引言
 Ⅱ.哺乳動物脊索中甘氨酸受體的純化
 Ⅲ.甘氨酸受體的異源表達(dá)
 Ⅳ.HEK293細(xì)胞中瞬時表達(dá)
 Ⅴ.2×BBS
 Ⅵ.桿狀病毒系統(tǒng)
 參考文獻(xiàn)
 24.Aquaporin水分子通道蛋白的功能分析
 Ⅰ.引言
 Ⅱ.紅血球AQP1蛋白的純化
 Ⅲ.AQP1在酵母中的表達(dá)
 Ⅳ.AQP1重組到蛋白脂質(zhì)體中
 Ⅴ.AQP1蛋白脂質(zhì)體的水滲透
Ⅵ.用簡并寡核苷酸PCR對Aquaporins的同源克隆
 Ⅶ.表達(dá)AQP1蛋白的蛙卵的水滲透
 參考文獻(xiàn)
第十部分 毒素和其他膜活性化合物
 25.離子通道的Conus多肽探針
 Ⅰ.引言
 Ⅱ.Conus探針的生化概述
Ⅲ.處理Conus多肽中的一些實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)
 參考文獻(xiàn)
 26.蝎毒作為研究鉀離子通道的工具
 Ⅰ.引言
Ⅱ.蝎毒液中鉀離子通道多肽抑制劑的純化
Ⅲ.通過重組技術(shù)合成鉀離子通道抑制劑多肽
 Ⅳ.鉀離子通道抑制性多肽的放射性標(biāo)記
 Ⅴ.受體結(jié)合研究
 Ⅵ.總結(jié)
 參考文獻(xiàn)
 27.利用平面脂雙層快速篩選膜活性化合物
 Ⅰ.更新
 Ⅱ.引言
 Ⅲ.一種新的雙層膜系統(tǒng)
 Ⅳ.平面脂膜的設(shè)置和區(qū)室
 Ⅴ.材料
 Ⅵ.平面脂膜灌流技術(shù)的應(yīng)用
 參考文獻(xiàn)
 28.離子通道抗體
 Ⅰ.引言
 Ⅱ.人類疾病中自發(fā)產(chǎn)生的抗體
 Ⅲ.配體門控的受體
 Ⅳ.電壓門控型離子通道
 Ⅴ.商業(yè)產(chǎn)品
 參考文獻(xiàn)
索引

編輯推薦

　　P.Michael Conn的這本《離子通道研究方法精要（導(dǎo)讀版）》以細(xì)胞膜上離子通道為主要對象，以介紹離子通道相關(guān)研究的主要方法和實(shí)驗(yàn)技術(shù)，提供實(shí)證性數(shù)據(jù)為目的，以不同的實(shí)驗(yàn)手段為切入點(diǎn)，從離子通道的組裝、遺傳、電生理、表達(dá)系統(tǒng)、模型模擬、物理、純化和重建、第二信使和生化手段、特殊通道等多個方面對離子通道的特點(diǎn)進(jìn)行了較為詳盡的解釋和闡述，既展示給讀者最前沿的理論，也提供了多種可行和改進(jìn)的實(shí)驗(yàn)方法和數(shù)據(jù)，并比較了不同方法間的優(yōu)勢所在。

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