抗體制備與使用實(shí)驗(yàn)指南

前言

　　抗體可稱為在地球上生命的發(fā)展歷史中最重要的一群蛋白。這些“魔彈”已經(jīng)成為生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究中不可或缺的工具。在近25年生物學(xué)領(lǐng)域所收獲的重要知識(shí)的浪潮中，抗體起著關(guān)鍵性的作用，而在醫(yī)學(xué)實(shí)踐方面，各種各樣疫苗的研究成功和使用已經(jīng)使多種傳染性疾病得到了控制（至少在發(fā)達(dá)國家是這樣），例如脊髓灰質(zhì)炎、腮腺炎、麻疹、水痘等，并且已基本使天花絕跡。　　我們希望本書對(duì)生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究人員和學(xué)生有所幫助。盡管未來在制備和使用抗體方面一定還會(huì)出現(xiàn)新的方法，但目前抗體的使用方法，如酶聯(lián)免疫試驗(yàn)（ELISAs）、蛋白質(zhì)印跡方法（Western Blot）、免疫組化、流式細(xì)胞術(shù)等，其功能是如此強(qiáng)大，以致于在未來相當(dāng)長的時(shí)間內(nèi)這些技術(shù)方法仍將對(duì)生物醫(yī)學(xué)科學(xué)領(lǐng)域起著關(guān)鍵作用?！　∥覀兿朐诖藢?duì)本書的所有作者表達(dá)深切謝意，在他們杰出的專業(yè)知識(shí)，優(yōu)秀的寫作和對(duì)本書的熱心支持下，本書的出版才成為可能。我們也想在此深切感謝CRC出版公司負(fù)責(zé)本書出版工作的編輯Judith Spiegel，感謝她對(duì)本書的諸多幫助和極大的耐心。

內(nèi)容概要

本書收集了抗體制備與使用中的基本實(shí)驗(yàn)方法及相關(guān)的最新科研進(jìn)展，這些方法是開展抗體制備研究的必備知識(shí)，包括鼠源性單克隆抗體的制備、純化、應(yīng)用以及抗體的修飾等，同時(shí)也包括部分基因重組性單克隆抗體，涉及內(nèi)容具體、全面，反映了國際上的最新發(fā)展方向。    本書對(duì)從事生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)與分子生物學(xué)、醫(yī)藥衛(wèi)生科學(xué)領(lǐng)域的科研技術(shù)人員，以及高等院校師生具有參考價(jià)值。

書籍目錄

譯者序前言第1章  抗體  1.1  一種多功能分子——抗體  1.2  相關(guān)倫理思考  1.3  實(shí)驗(yàn)室安全  1.4  手冊(cè)編排  參考文獻(xiàn)第2章  抗原第3章  佐劑第4章  多克隆抗體制備第5章  單克隆抗體的制備第6章  單克隆抗體的定量生產(chǎn)第7章  抗體的純化和鑒定第8章  細(xì)菌中制備抗體第9章  抗體的化學(xué)和蛋白水解修飾第10章  抗體的應(yīng)用第11章  免疫組織化學(xué)法第12章  免疫電子顯微鏡第13章  流式細(xì)胞術(shù)第14章  酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)第15章  抗體的未來：挑戰(zhàn)與機(jī)遇索引彩圖

章節(jié)摘錄

　　2.2多肽抗原　　多肽無疑是生產(chǎn)抗原的最快方式，可用于免疫接種來制備抗體。許多機(jī)構(gòu)和公司發(fā)現(xiàn)保持核心多肽合成的能力經(jīng)濟(jì)有效。如果不具備多肽合成能力，一些商業(yè)公司提供多肽合成定制服務(wù)。這種方法可靠、經(jīng)濟(jì)，可在幾周之內(nèi)提供高質(zhì)量的多肽，其數(shù)量足以用于免疫接種。對(duì)于典型的多肽免疫原，大約500美元可以買到10mg含15個(gè)氨基酸并且純度>80％的多肽（circa 2005），這些多肽足夠免疫幾個(gè)動(dòng)物來得到抗體，并用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)進(jìn)行抗體篩選?！　《嚯目梢蕴貏e有效地提高抗體對(duì)抗原某區(qū)域的特異性，如新的結(jié)構(gòu)域或同源性最低的區(qū)域。當(dāng)抗原沒有其他來源的時(shí)候，也可使用多肽。許多情況下，重組蛋白因?yàn)椴荒鼙槐磉_(dá)和純化而不能作為抗原的來源。對(duì)于大分子跨膜蛋白，如G蛋白偶聯(lián)受體（在制藥領(lǐng)域重要的分子家族）來說這是經(jīng)常發(fā)生的，對(duì)應(yīng)胞外結(jié)構(gòu)域蛋白環(huán)狀結(jié)構(gòu)的短肽已被證明是可行的免疫原，可以產(chǎn)生針對(duì)這些復(fù)雜分子的抗體?！　∮?個(gè)氨基酸組成的肽可以用來制備抗血清，由10～12個(gè)氨基酸殘基組成的多肽通常有更高的免疫原性[2]。一個(gè)較短的抗原表位的例子是Flag標(biāo)簽，其在蛋白質(zhì)純化、鑒定和功能分析領(lǐng)域被廣泛使用。這是一個(gè)八肽序列（DYKDDDDK），其單克隆抗體和多克隆抗體很容易買到。我們發(fā)現(xiàn)由12～15個(gè)氨基酸組成的多肽在多數(shù)情況下都是非常好的免疫原。由30～35個(gè)氨基酸組成的較長多肽，雖然本身化學(xué)合成受限，但也是非常好的免疫原，其優(yōu)點(diǎn)是可能會(huì)形成相關(guān)的二級(jí)結(jié)構(gòu)。多肽免疫原使用受限是因?yàn)槠渚€性表位序列短，在一個(gè)完整的蛋白質(zhì)抗原中不易被識(shí)別。因而由多肽產(chǎn)生的抗體趨向于識(shí)別線性表位，總的來說，在免疫印跡實(shí)驗(yàn)和其他識(shí)別變性蛋白的抗體實(shí)驗(yàn)中效果非常好。然而，由多肽產(chǎn)生的抗體通常不能識(shí)別蛋白質(zhì)構(gòu)象，因此不太可能和天然分子反應(yīng)。這樣的抗體往往沒有功能，不能用于流式細(xì)胞儀。但是應(yīng)該指出的是，在有些情況下多肽免疫原確實(shí)能夠生成能識(shí)別天然蛋白質(zhì)的抗體。例如，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)抗原的線性表位沒有被其三級(jí)結(jié)構(gòu)所掩蓋的時(shí)候。

圖書封面

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