抗體制備與使用實驗指南

前言

　　抗體可稱為在地球上生命的發(fā)展歷史中最重要的一群蛋白。這些“魔彈”已經(jīng)成為生物學和醫(yī)學研究中不可或缺的工具。在近25年生物學領域所收獲的重要知識的浪潮中，抗體起著關鍵性的作用，而在醫(yī)學實踐方面，各種各樣疫苗的研究成功和使用已經(jīng)使多種傳染性疾病得到了控制（至少在發(fā)達國家是這樣），例如脊髓灰質(zhì)炎、腮腺炎、麻疹、水痘等，并且已基本使天花絕跡?！　∥覀兿Ｍ緯鴮ι镝t(yī)學領域的研究人員和學生有所幫助。盡管未來在制備和使用抗體方面一定還會出現(xiàn)新的方法，但目前抗體的使用方法，如酶聯(lián)免疫試驗（ELISAs）、蛋白質(zhì)印跡方法（Western Blot）、免疫組化、流式細胞術等，其功能是如此強大，以致于在未來相當長的時間內(nèi)這些技術方法仍將對生物醫(yī)學科學領域起著關鍵作用?！　∥覀兿朐诖藢Ρ緯乃凶髡弑磉_深切謝意，在他們杰出的專業(yè)知識，優(yōu)秀的寫作和對本書的熱心支持下，本書的出版才成為可能。我們也想在此深切感謝CRC出版公司負責本書出版工作的編輯Judith Spiegel，感謝她對本書的諸多幫助和極大的耐心。

內(nèi)容概要

本書收集了抗體制備與使用中的基本實驗方法及相關的最新科研進展，這些方法是開展抗體制備研究的必備知識，包括鼠源性單克隆抗體的制備、純化、應用以及抗體的修飾等，同時也包括部分基因重組性單克隆抗體，涉及內(nèi)容具體、全面，反映了國際上的最新發(fā)展方向。    本書對從事生物學、免疫學、生物化學與分子生物學、醫(yī)藥衛(wèi)生科學領域的科研技術人員，以及高等院校師生具有參考價值。

書籍目錄

譯者序前言第1章  抗體  1.1  一種多功能分子——抗體  1.2  相關倫理思考  1.3  實驗室安全  1.4  手冊編排  參考文獻第2章  抗原第3章  佐劑第4章  多克隆抗體制備第5章  單克隆抗體的制備第6章  單克隆抗體的定量生產(chǎn)第7章  抗體的純化和鑒定第8章  細菌中制備抗體第9章  抗體的化學和蛋白水解修飾第10章  抗體的應用第11章  免疫組織化學法第12章  免疫電子顯微鏡第13章  流式細胞術第14章  酶聯(lián)免疫吸附試驗第15章  抗體的未來：挑戰(zhàn)與機遇索引彩圖

章節(jié)摘錄

　　2.2多肽抗原　　多肽無疑是生產(chǎn)抗原的最快方式，可用于免疫接種來制備抗體。許多機構和公司發(fā)現(xiàn)保持核心多肽合成的能力經(jīng)濟有效。如果不具備多肽合成能力，一些商業(yè)公司提供多肽合成定制服務。這種方法可靠、經(jīng)濟，可在幾周之內(nèi)提供高質(zhì)量的多肽，其數(shù)量足以用于免疫接種。對于典型的多肽免疫原，大約500美元可以買到10mg含15個氨基酸并且純度>80％的多肽（circa 2005），這些多肽足夠免疫幾個動物來得到抗體，并用酶聯(lián)免疫吸附試驗進行抗體篩選?！　《嚯目梢蕴貏e有效地提高抗體對抗原某區(qū)域的特異性，如新的結構域或同源性最低的區(qū)域。當抗原沒有其他來源的時候，也可使用多肽。許多情況下，重組蛋白因為不能被表達和純化而不能作為抗原的來源。對于大分子跨膜蛋白，如G蛋白偶聯(lián)受體（在制藥領域重要的分子家族）來說這是經(jīng)常發(fā)生的，對應胞外結構域蛋白環(huán)狀結構的短肽已被證明是可行的免疫原，可以產(chǎn)生針對這些復雜分子的抗體。　　由6個氨基酸組成的肽可以用來制備抗血清，由10～12個氨基酸殘基組成的多肽通常有更高的免疫原性[2]。一個較短的抗原表位的例子是Flag標簽，其在蛋白質(zhì)純化、鑒定和功能分析領域被廣泛使用。這是一個八肽序列（DYKDDDDK），其單克隆抗體和多克隆抗體很容易買到。我們發(fā)現(xiàn)由12～15個氨基酸組成的多肽在多數(shù)情況下都是非常好的免疫原。由30～35個氨基酸組成的較長多肽，雖然本身化學合成受限，但也是非常好的免疫原，其優(yōu)點是可能會形成相關的二級結構。多肽免疫原使用受限是因為其線性表位序列短，在一個完整的蛋白質(zhì)抗原中不易被識別。因而由多肽產(chǎn)生的抗體趨向于識別線性表位，總的來說，在免疫印跡實驗和其他識別變性蛋白的抗體實驗中效果非常好。然而，由多肽產(chǎn)生的抗體通常不能識別蛋白質(zhì)構象，因此不太可能和天然分子反應。這樣的抗體往往沒有功能，不能用于流式細胞儀。但是應該指出的是，在有些情況下多肽免疫原確實能夠生成能識別天然蛋白質(zhì)的抗體。例如，當?shù)鞍踪|(zhì)抗原的線性表位沒有被其三級結構所掩蓋的時候。

圖書封面

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