生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)

前言

　　隨著生命科學(xué)的迅速發(fā)展，人們?cè)诳蒲泻蛯?shí)踐中對(duì)實(shí)驗(yàn)技術(shù)的需求越來(lái)越迫切。生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)是發(fā)展生命科學(xué)的主要技術(shù)工具，是生物技術(shù)和生物工程技術(shù)的核心。在工業(yè)、農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生、環(huán)境科學(xué)等研究領(lǐng)域和生產(chǎn)實(shí)踐中，以生命科學(xué)理論為基礎(chǔ)，以其實(shí)驗(yàn)技術(shù)方法為手段，取得了令人矚目的成就，產(chǎn)生了巨大的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)作為高等學(xué)校某些新的相關(guān)專業(yè)的必修課程，一直希望有一本合適的教材。　　我們?cè)诳偨Y(jié)過(guò)去教學(xué)經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，結(jié)合已出版的幾本實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)，借鑒兄弟院校的教學(xué)內(nèi)容和方法，組織編寫了這本教材?！　∪珪稚茖W(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及附錄三個(gè)部分。技術(shù)原理部分較系統(tǒng)介紹了電泳、層析、分光、離心、同位素技術(shù)和分子生物學(xué)幾項(xiàng)常規(guī)技術(shù)的基本理論，簡(jiǎn)要介紹了生物大分子分離純化的一般原則。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容編者本著簡(jiǎn)便、實(shí)用、可操作性強(qiáng)、便于教學(xué)安排的原則，共選編了50佘個(gè)實(shí)驗(yàn)，涉及普通生化實(shí)驗(yàn)與分子生物學(xué)及基因工程、酶工程、蛋白質(zhì)、酶、核酸等生物分子的分離、制備、純化及分析鑒定技術(shù)。既注重學(xué)生的基本功訓(xùn)練，又注意引進(jìn)一些新的、反映現(xiàn)代生命科學(xué)發(fā)展前沿的技術(shù)方法。其中，大部分實(shí)驗(yàn)是本校生物技術(shù)、醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、衛(wèi)生檢驗(yàn)、臨床醫(yī)學(xué)等專業(yè)和碩士生所做過(guò)的。一般在4－16學(xué)時(shí)內(nèi)可以完成。某些章節(jié)后附有思考題供學(xué)生深入學(xué)習(xí)理解。附錄部分包括實(shí)驗(yàn)室的基本操作、試劑的配制與保存、常用儀器的使用方法等，供讀者查閱和參考。

內(nèi)容概要

本書為全國(guó)高等院校實(shí)驗(yàn)教學(xué)系列規(guī)劃教材。全書分生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及附錄三個(gè)部分。第一部分共十章，較系統(tǒng)介紹了電泳、層析、分光、離心、同位素示蹤技術(shù)和分子生物學(xué)幾項(xiàng)常規(guī)技術(shù)，包括酵母雙雜交、DNA重組、核酸分子雜交、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)的基本理論，簡(jiǎn)要介紹了生物大分子分離純化的一般原則。第二部分包括生物化學(xué)、分子生物學(xué)、基因工程、生化技術(shù)、酶工程等56個(gè)實(shí)驗(yàn)，涉及普通生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)與蛋白質(zhì)、酶、核酸等生物分子的分離、制備、純化及分析鑒定技術(shù)。附錄部分包括實(shí)驗(yàn)室的基本操作、試劑的配制與保存、常用儀器的使用方法等，供讀者查閱和參考。    本書可供開設(shè)相應(yīng)實(shí)驗(yàn)課程的醫(yī)學(xué)、生物科學(xué)、生物技術(shù)、藥學(xué)、醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、衛(wèi)生檢驗(yàn)等專業(yè)本科生及有關(guān)專業(yè)碩士生使用，也可供相關(guān)科技工作者參考。

書籍目錄

第一部分  生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理  第一章  電泳技術(shù)    第一節(jié)  概述    第二節(jié)  電泳的基本原理    第三節(jié)  區(qū)帶電泳技術(shù)    第四節(jié)  染色方法  第二章  層析技術(shù)    第一節(jié)  概述    第二節(jié)  層析技術(shù)的基本理論    第三節(jié)  層析定性與定量分析    第四節(jié)  常用的層析方法  第三章  分光光度法    第一節(jié)  概述    第二節(jié)  光吸收的基本規(guī)律    第三節(jié)  分光光度計(jì)的構(gòu)造和類型    第四節(jié)  定性、定量方法及其應(yīng)用    第五節(jié)  雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)及其測(cè)定方法  第四章  超離心技術(shù)    第一節(jié)  概述    第二節(jié)  超離心分離方法    第三節(jié)  密度梯度液的制備和區(qū)帶收集    第四節(jié)  制備超離心機(jī)做沉淀分析  第五章  生物大分子的分離純化與鑒定    第一節(jié)  生物大分子制備的前處理    第二節(jié)  分離純化    第三節(jié)  生物大分子的濃縮、干燥和保存    第四節(jié)  生物大分子含量的測(cè)定和純度鑒定  第六章  放射性同位素示蹤技術(shù)  第七章  酵母雙雜交技術(shù)  第八章  DNA重組技術(shù)  第九章  核酸分子雜交技術(shù)  第十章  聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)第二部分  實(shí)驗(yàn)內(nèi)容  第十一章  生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)    實(shí)驗(yàn)一  血清蛋白質(zhì)醋酸纖維薄膜電泳    實(shí)驗(yàn)二  血清蛋白聚丙烯酰胺凝膠圓盤電泳    實(shí)驗(yàn)三  圓盤電泳分離LDH同工酶    實(shí)驗(yàn)四  氨基酸雙向紙層析    實(shí)驗(yàn)五  動(dòng)物組織DNA的提取和鑒定    實(shí)驗(yàn)六  動(dòng)物組織RNA的提取和鑒定    實(shí)驗(yàn)七  影響酶活性的因素    實(shí)驗(yàn)八  胡蘿卜素的柱層析分離    實(shí)驗(yàn)九  肝糖原的提取鑒定與定量    實(shí)驗(yàn)十  血糖濃度的測(cè)定與胰島素、腎上腺素對(duì)血糖濃度影響    實(shí)驗(yàn)十一  運(yùn)動(dòng)后血中乳酸含量的變化    實(shí)驗(yàn)十二  血清脂蛋白瓊脂糖凝膠電泳    實(shí)驗(yàn)十三  血清總膽固醇測(cè)定(磷硫鐵法)    實(shí)驗(yàn)十四  琥珀酸脫氫酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制    實(shí)驗(yàn)十五  氨基酸的薄層層析    實(shí)驗(yàn)十六  血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性測(cè)定    實(shí)驗(yàn)十七  凝膠層析分離血紅蛋白與CuSO4    實(shí)驗(yàn)十八  血清總蛋白的測(cè)定及標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作(雙縮脲法)    實(shí)驗(yàn)十九  血清尿素氮的測(cè)定    實(shí)驗(yàn)二十  3H-胸苷摻入DNA的試驗(yàn)    實(shí)驗(yàn)二十一  32P摻入磷脂的試驗(yàn)  第十二章  分子生物學(xué)與基因工程實(shí)驗(yàn)    實(shí)驗(yàn)一  質(zhì)粒DNA的微量快速提取    實(shí)驗(yàn)二  質(zhì)粒DNA的酶切與鑒定    實(shí)驗(yàn)三  聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(PCR)    實(shí)驗(yàn)四  DNA重組與鑒定    實(shí)驗(yàn)五  DNA印跡雜交技術(shù)    實(shí)驗(yàn)六  肝總RNA的制備    實(shí)驗(yàn)七  克隆化基因在大腸埃希菌的誘導(dǎo)表達(dá)    實(shí)驗(yàn)八  哺乳動(dòng)物細(xì)胞的轉(zhuǎn)染    實(shí)驗(yàn)九  蛋白質(zhì)印跡免疫分析    實(shí)驗(yàn)十  DNA的提取    實(shí)驗(yàn)十一  細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)    實(shí)驗(yàn)十二  細(xì)胞凋亡檢測(cè)    實(shí)驗(yàn)十三  用電穿孔方法將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化細(xì)菌    實(shí)驗(yàn)十四  Northern雜交技術(shù)  第十三章  生化技術(shù)實(shí)驗(yàn)    實(shí)驗(yàn)一  血紅蛋白及其衍生物的吸收光譜測(cè)定    實(shí)驗(yàn)二  核酸溶液的紫外吸收測(cè)定    實(shí)驗(yàn)三  蛋白質(zhì)溶液的紫外吸收測(cè)定    實(shí)驗(yàn)四  SDS-PAGE分離蛋白質(zhì)    實(shí)驗(yàn)五  蛋白質(zhì)定量測(cè)定Folin-酚試劑法(Lowry法)    實(shí)驗(yàn)六  聚丙烯酰胺凝膠等電聚焦分離血清蛋白質(zhì)    實(shí)驗(yàn)七  血清脂蛋白快速超離心分離實(shí)驗(yàn)    實(shí)驗(yàn)八  DEAE纖維素離子交換層析法分離血清蛋白質(zhì)    實(shí)驗(yàn)九  親和層析法純化胰蛋白酶    實(shí)驗(yàn)十  血清白蛋白、γ球蛋白的分離純化及鑒定    實(shí)驗(yàn)十一  密度梯度離心法分離肝細(xì)胞器    實(shí)驗(yàn)十二  外周血DNA的快速提取  第十四章  酶工程實(shí)驗(yàn)    實(shí)驗(yàn)一  凝血酶的固定化及固定化凝血酶的穩(wěn)定性測(cè)定    實(shí)驗(yàn)二  固定化具有葡萄糖異構(gòu)酶活性菌體的制備    實(shí)驗(yàn)三  CuZn超氧化物歧化酶的分離與純化    實(shí)驗(yàn)四  細(xì)胞色素c的制備和含量測(cè)定    實(shí)驗(yàn)五  綠豆芽中酸性磷酸酯酶的提取    實(shí)驗(yàn)六  pH對(duì)酶活力的影響——最適pH的測(cè)定    實(shí)驗(yàn)七  溫度對(duì)酶活力的影響——最適溫度的測(cè)定    實(shí)驗(yàn)八  底物濃度和抑制劑對(duì)酶活力的影響——Km和Ki的測(cè)定    實(shí)驗(yàn)九  酶促反應(yīng)速度與時(shí)間的關(guān)系——初速度時(shí)間范圍的測(cè)定  附錄    附錄1  生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)的基本操作及原理    附錄2  常用容量?jī)x器的規(guī)格、使用、清洗及洗液的配制    附錄3  化學(xué)試劑的規(guī)格與保管    附錄4  實(shí)驗(yàn)室常用設(shè)備介紹    附錄5  分子生物學(xué)常用試劑

章節(jié)摘錄

　　紙上電泳與醋酸纖維薄膜電泳（cellulose acetate membrane electrophoresis）分別以濾紙和醋酸纖維薄膜為支持物。濾紙是纖維素，醋酸纖維薄膜是纖維素的醋酸酯，由纖維素的羥基經(jīng)乙酰化而成。它溶于丙酮等有機(jī)溶液中，即可涂布成均一細(xì)密的微孔薄膜，厚度約以0.1-0.15mm、為宜。太厚吸水性差，分離效果不好；太薄則膜片缺少應(yīng)有的機(jī)械強(qiáng)度則易碎。目前，國(guó)內(nèi)有醋酸纖維薄膜商品出售，不同廠家生產(chǎn)的薄膜主要在乙?；?、厚度、孔徑、網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)等方面有所不同，但分離效果基本一致。　　紙上電泳是在20世紀(jì)40年代與紙層析一道發(fā)展起來(lái)的分離技術(shù)。由于具有簡(jiǎn)便、迅速等優(yōu)點(diǎn)，在實(shí)驗(yàn)室和臨床檢驗(yàn)中廣泛應(yīng)用。自1957年Kohn首先將醋酸纖維薄膜用作為電泳支持物以來(lái)，紙上電泳已被醋酸纖維薄膜電泳所取代。因?yàn)?，后者具有比紙上電泳電滲小，分離速度快，分離清晰，血清用量少，操作簡(jiǎn)便，電泳染色后，經(jīng)冰乙酸、乙醇混合液或其他溶液浸泡后可制成透明的干板，有利于掃描定量及長(zhǎng)期保存等優(yōu)點(diǎn)?！　∮捎诖姿崂w維薄膜電泳操作簡(jiǎn)單、快速、價(jià)廉。已廣泛用于分析檢測(cè)血漿蛋白、脂蛋白、糖蛋白，胎兒甲種球蛋白，體液、腦脊液、脫氫酶、多肽，核酸及其他生物大分子，為心血管疾病、肝硬化及某些癌癥鑒別診斷提供了可靠的依據(jù)，因而已成為醫(yī)學(xué)和臨床檢驗(yàn)的常規(guī)技術(shù)?！　　?/pre>








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