實(shí)驗(yàn)過敏反應(yīng)學(xué)

前言

過敏反應(yīng)學(xué)在世界上已有100多年的歷史，隨著人們對過敏性疾病認(rèn)識的不斷加深，尤其是近二三十年來分子免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、生物信息學(xué)、基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)等學(xué)科的迅猛發(fā)展，使過敏反應(yīng)學(xué)領(lǐng)域的研究水平不斷提升，新的突破不斷出現(xiàn)，研究內(nèi)容更是日新月異，成為醫(yī)學(xué)乃至生命科學(xué)研究工作一個(gè)極為活躍的領(lǐng)域。過敏反應(yīng)學(xué)的迅猛發(fā)展對研究和診斷手段提出了更高的要求，該書從細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)在過敏反應(yīng)學(xué)中的應(yīng)用、生物化學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)在過敏反應(yīng)學(xué)中的應(yīng)用、蛋白質(zhì)組學(xué)與生物信息學(xué)在過敏反應(yīng)學(xué)中的應(yīng)用、抗體技術(shù)在過敏反應(yīng)學(xué)中的應(yīng)用、過敏反應(yīng)相關(guān)的動物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀⑴R床相關(guān)的過敏反應(yīng)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)以及常見過敏原的收集與鑒定人手，系統(tǒng)地闡述了過敏反應(yīng)學(xué)的實(shí)驗(yàn)室研究和診斷的方法，是對近20年來國內(nèi)外相關(guān)領(lǐng)域進(jìn)展的一次總結(jié)，為從事過敏反應(yīng)學(xué)相關(guān)工作的基礎(chǔ)研究者、臨床工作者以及研究生等人員提供了一部重要的參考書。與過敏反應(yīng)學(xué)的臨床發(fā)展比較，我國實(shí)驗(yàn)過敏反應(yīng)學(xué)領(lǐng)域的發(fā)展速度較慢，專業(yè)實(shí)驗(yàn)室較少，取得的標(biāo)志性成果也較少，與國際先進(jìn)水平相比尚有一定差距。而我國過敏性疾病的發(fā)病率約為20％，極大危害著公共健康，因此十分有必要對這類疾病的發(fā)病機(jī)制及診治方法進(jìn)行系統(tǒng)深入的研究。該書將為促進(jìn)我國過敏性疾病的研究與國際先進(jìn)水平盡快接軌發(fā)揮積極作用。何韶衡教授從事過敏反應(yīng)基礎(chǔ)研究已20余年，取得了顯著的成績，積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)，并為國家培養(yǎng)了一批優(yōu)秀的學(xué)生，為過敏反應(yīng)學(xué)基礎(chǔ)研究增添了新鮮血液。編著人員在廣泛收集、整理和吸收國內(nèi)外相關(guān)資料、信息和技術(shù)的基礎(chǔ)上，結(jié)合各自的研究工作實(shí)踐，對過敏反應(yīng)學(xué)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了較全面、深入的討論和探索。該書述及內(nèi)容豐富，將會進(jìn)一步促進(jìn)我國過敏反應(yīng)學(xué)科的發(fā)展。值此書出版發(fā)行之際，謹(jǐn)以此文為之作序。

內(nèi)容概要

本書系統(tǒng)深入地介紹了過敏反應(yīng)學(xué)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)及其最新研究進(jìn)展，從實(shí)驗(yàn)背景知識、實(shí)驗(yàn)材料、實(shí)驗(yàn)方法、注意事項(xiàng)等方面論述了每一個(gè)實(shí)驗(yàn)，力求使讀者能夠按照我們介紹的步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)得到滿意的結(jié)果。全書分為細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)在過敏反應(yīng)學(xué)中的應(yīng)用、生物化學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)在過敏反應(yīng)學(xué)中的應(yīng)用、蛋白質(zhì)組學(xué)與生物信息學(xué)在過敏反應(yīng)學(xué)中的應(yīng)用、抗體技術(shù)在過敏反應(yīng)學(xué)中的應(yīng)用、過敏反應(yīng)相關(guān)的動物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀⑴R床相關(guān)的過敏反應(yīng)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)以及常見過敏原的收集與鑒定六個(gè)部分共15章。    本書由從事過敏反應(yīng)學(xué)基礎(chǔ)研究和臨床檢驗(yàn)領(lǐng)域的專家編著，可供從事過敏反應(yīng)學(xué)的科研工作者、臨床醫(yī)學(xué)工作者參考，也可作為醫(yī)學(xué)院校的授課教材使用。

作者簡介

何韶衡，1957年出生，四川三臺縣人，博士，教育部“長江學(xué)者”特聘教授。曾在英國、美國留學(xué)12年，獲英國皇家學(xué)會獎勵及英國南安普頓大學(xué)超聘一級工資的獎勵。1999年在世界著名的英國南安普頓大學(xué)呼吸細(xì)胞與分子生物學(xué)分豌任高級研究員，博士生導(dǎo)師，是分院領(lǐng)導(dǎo)中唯一的亞裔成員?，F(xiàn)任南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院臨床實(shí)驗(yàn)研究中心主任。變態(tài)反應(yīng)研究所所長，江蘇省醫(yī)學(xué)領(lǐng)軍人才，中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)客座教授。主要從事過敏性疾病發(fā)病機(jī)制的研究及過敏性疾病診治手段的研發(fā)工作，是國際知名專家，2009年入選Who s who in the World。

書籍目錄

序 前言 第一篇 細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)在過敏反應(yīng)學(xué)中的應(yīng)用   第1章 過敏反應(yīng)相關(guān)細(xì)胞的分離、純化、培養(yǎng)、鑒定     第一節(jié) 細(xì)胞分離、純化、培養(yǎng)、鑒定的基本原理     第二節(jié) 樹突狀細(xì)胞的分離、純化、培養(yǎng)、鑒定     第三節(jié) T、B淋巴細(xì)胞的分離、純化、培養(yǎng)、鑒定     第四節(jié) 肥大細(xì)胞的分離、純化、培養(yǎng)、鑒定     第五節(jié) 嗜堿性粒細(xì)胞的分離、純化、培養(yǎng)、鑒定     第六節(jié) 嗜酸性粒細(xì)胞的分離、純化、培養(yǎng)、鑒定     第七節(jié) 中性粒細(xì)胞的分離、純化、培養(yǎng)、鑒定     第八節(jié) 單核／巨噬細(xì)胞的分離、純化、培養(yǎng)、鑒定     第九節(jié) 上皮細(xì)胞的分離、純化、培養(yǎng)、鑒定     第十節(jié) 內(nèi)皮細(xì)胞的分離、培養(yǎng)、純化、鑒定     第十一節(jié) 呼吸道平滑肌細(xì)胞的分離、純化、培養(yǎng)、鑒定     第十二節(jié) 成纖維細(xì)胞的分離、純化、培養(yǎng)、鑒定     第十三節(jié) 干細(xì)胞的培養(yǎng)     第十四節(jié) 細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇     第十五節(jié) 神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的分離、純化、培養(yǎng)、鑒定     第十六節(jié) 血小板的分離、純化、培養(yǎng)、鑒定     參考文獻(xiàn)   第2章 過敏反應(yīng)相關(guān)的細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)     第一節(jié) 肥大細(xì)胞激發(fā)實(shí)驗(yàn)     第二節(jié) 嗜堿性粒細(xì)胞激發(fā)實(shí)驗(yàn)     第三節(jié) 黏液分泌細(xì)胞刺激實(shí)驗(yàn)     第四節(jié) T、B細(xì)胞激發(fā)實(shí)驗(yàn)     第五節(jié) 樹突狀細(xì)胞激發(fā)實(shí)驗(yàn)     第六節(jié) 內(nèi)皮細(xì)胞激發(fā)實(shí)驗(yàn)     第七節(jié) 成纖維細(xì)胞激發(fā)實(shí)驗(yàn)     第八節(jié) 神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞激發(fā)實(shí)驗(yàn)     第九節(jié) 細(xì)胞趨化性和細(xì)胞膜通透性實(shí)驗(yàn)     第十節(jié) 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)     第十一節(jié) 呼吸道平滑肌激發(fā)、收縮實(shí)驗(yàn)     第十二節(jié) 細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)     參考文獻(xiàn)   第3章 細(xì)胞成分的標(biāo)記和檢測     第一節(jié) 常用組織和細(xì)胞取材及固定方法     第二節(jié) 組織切片的制備     第三節(jié) 組織化學(xué)染色     第四節(jié) 免疫組織化學(xué)染色     第五節(jié) 免疫組織化學(xué)雙重或多重標(biāo)記     第六節(jié) 酶-底物染色     第七節(jié) 原位雜交染色     第八節(jié) 免疫膠體金染色     第九節(jié) 激光共聚焦顯微鏡技術(shù)     第十節(jié) 流式細(xì)胞術(shù)     第十一節(jié) 細(xì)胞內(nèi)鈣離子水平測定     第十二節(jié) 鑒定細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的常用技術(shù)     參考文獻(xiàn) 第二篇 生物化學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)在過敏反應(yīng)學(xué)中的應(yīng)用   第4章 過敏反應(yīng)相關(guān)的蛋白質(zhì)純化技術(shù)     第一節(jié) 過敏原蛋白質(zhì)組分的提取與制備     第二節(jié) 蛋白質(zhì)電泳技術(shù)     第三節(jié) 點(diǎn)雜交和免疫印跡     第四節(jié) 蛋白質(zhì)的分離與純化     第五節(jié) 蛋白質(zhì)濃度測定     第六節(jié) 蛋白酶活性測定     第七節(jié) 蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)的測定方法     第八節(jié) 蛋白質(zhì)的分子質(zhì)量測定     第九節(jié) 過敏原生物學(xué)功能鑒定     第十節(jié) 表面等離子體共振技術(shù)     參考文獻(xiàn)   第5章 過敏反應(yīng)相關(guān)的分子生物學(xué)技術(shù)     第一節(jié) 常規(guī)分子生物學(xué)技術(shù)     第二節(jié) 普通PCR及熒光定量PCR技術(shù)     第三節(jié) 重組蛋白表達(dá)與純化     第四節(jié) 細(xì)胞轉(zhuǎn)染     第五節(jié) cDNA文庫的建立     第六節(jié) Northern blot和Southern blot     第七節(jié) 反義RNA技術(shù)     第八節(jié) RNA干擾技術(shù)     第九節(jié) 表位確定     第十節(jié) 限制性片段多態(tài)性技術(shù)、單鏈型多態(tài)性技術(shù)、單核苷酸多態(tài)性技術(shù)     第十一節(jié) 點(diǎn)突變技術(shù)在低過敏原性疫苗中的應(yīng)用     第十二節(jié) MicroRNA技術(shù)     參考文獻(xiàn) 第三篇 蛋白質(zhì)組學(xué)與生物信息學(xué)在過敏反應(yīng)學(xué)中的應(yīng)用   第6章 蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)及在過敏反應(yīng)學(xué)中的應(yīng)用     第一節(jié) 過敏原蛋白質(zhì)組分的雙向電泳分離技術(shù)     第二節(jié) 過敏原蛋白質(zhì)的質(zhì)譜分析和鑒定技術(shù)     第三節(jié) 過敏原蛋白質(zhì)組學(xué)研究的策略與方法     參考文獻(xiàn)   第7章 生物信息學(xué)在過敏原研究中的應(yīng)用     第一節(jié) 生物信息學(xué)的主要研究內(nèi)容     第二節(jié) 生物信息學(xué)在過敏反應(yīng)學(xué)中的應(yīng)用     參考文獻(xiàn) 第四篇 抗體技術(shù)在過敏反應(yīng)學(xué)中的應(yīng)用   第8章 抗體制備     第一節(jié) 抗體制備的目的及基本原理     第二節(jié) 多克隆抗體制備     第三節(jié) 單克隆抗體制備     第四節(jié) 抗體的純化與鑒定     參考文獻(xiàn)   第9章 基因工程抗體     第一節(jié) 抗體工程     第二節(jié) 抗體的修飾和標(biāo)記     參考文獻(xiàn) 第五篇 過敏反應(yīng)相關(guān)的動物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?  第10章 哮喘相關(guān)的動物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?    第一節(jié) 豚鼠支氣管哮喘模型     第二節(jié) 小鼠支氣管哮喘模型     第三節(jié) 大鼠支氣管哮喘模型     第四節(jié) 狗哮喘模型     第五節(jié) 靈長類哮喘模型     第六節(jié) 貓哮喘模型     第七節(jié) 兔哮喘模型     第八節(jié) 綿羊哮喘模型     參考文獻(xiàn)   第11章 過敏性鼻炎相關(guān)的動物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?    參考文獻(xiàn)   第12章 其他動物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?    第一節(jié) 大鼠足跖腫脹模型     第二節(jié) 大白鼠皮膚毛細(xì)血管通透性模型     第三節(jié) 小白鼠腹腔炎癥性細(xì)胞浸潤模型     第四節(jié) 大白鼠皮膚炎癥性細(xì)胞浸潤模型     第五節(jié) 實(shí)驗(yàn)性過敏性腦脊髓炎模型     第六節(jié) 過敏性腸炎模型     參考文獻(xiàn) 第六篇 臨床相關(guān)的過敏反應(yīng)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)   第13章 體液或培養(yǎng)液中特異性成分的測定     第一節(jié) 組胺水平測定     第二節(jié) 酶聯(lián)免疫吸附測定     第三節(jié) 酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法     第四節(jié) 放射免疫分析法     第五節(jié) ImmunoCAP系統(tǒng)     第六節(jié) 血清食物特異性IgG的檢測     第七節(jié) 白三烯測定     第八節(jié) 過敏性皮炎模型     第九節(jié) 皮膚斑貼實(shí)驗(yàn)     參考文獻(xiàn)   第14章 吸入性過敏原的收集與鑒定     第一節(jié) 吸入性過敏原的收集     第二節(jié) 吸入性過敏原的鑒定     參考文獻(xiàn)   第15章 食入性過敏原的收集與鑒定     第一節(jié) 食入性過敏原的收集     第二節(jié) 食入性過敏原的鑒定 參考文獻(xiàn) 中英文索引

章節(jié)摘錄

插圖：上皮細(xì)胞細(xì)胞之間以及上皮細(xì)胞與成纖維細(xì)胞之間連接緊密，上皮細(xì)胞所用的消化酶的濃度與消化時(shí)間不易掌握。若消化酶的濃度與消化時(shí)間控制不好，使消化不到位，則分離下來的細(xì)胞數(shù)量較少；消化過度則可能將黏膜層的成纖維細(xì)胞連帶消化下來，同時(shí)可能破壞已消化下來的細(xì)胞膜的完整性，影響已分離的上皮細(xì)胞的質(zhì)量，不能很好地貼壁、增殖與應(yīng)用。使用酶消化聯(lián)合機(jī)械刷洗法分離培養(yǎng)，不僅簡化操作過程，減少污染概率，也使細(xì)胞在酶的消化作用下易于脫落，稍加刷洗即可得。采用鏈酶蛋白酶消化時(shí)，細(xì)胞易于分散脫落，且對細(xì)胞損傷相對較小，結(jié)合細(xì)胞刷刷洗，不僅可大量回收基底層細(xì)胞，且提高了上皮細(xì)胞的收獲量與存活率。秦曉群等分別比較了酶消化法、機(jī)械刷洗以及消化后刷洗3種方法分離家兔氣管一支氣管上皮細(xì)胞，結(jié)果表明消化后刷洗方法可得到的細(xì)胞數(shù)量與存活率高于前兩種方法。利用酶消化聯(lián)合機(jī)械刷洗法獲得的上皮細(xì)胞純度與成活率高，收獲的細(xì)胞數(shù)量較多，避免了單純消化法的細(xì)胞得率低、純度低及存活率低的缺點(diǎn)，尤其是單純刷（刮）洗方法難免會將成纖維細(xì)胞一起刷洗下來。成纖維細(xì)胞與上皮細(xì)胞共存狀態(tài)下會造成上皮細(xì)胞生長抑制。經(jīng)改良的無血清完全F12培養(yǎng)基更適合上皮細(xì)胞培養(yǎng)，無血清培養(yǎng)可提高培養(yǎng)上皮細(xì)胞的純度，促進(jìn)細(xì)胞融合，細(xì)胞生長狀態(tài)良好。

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