生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

前言

隨著分子生物學(xué)的快速發(fā)展，生物化學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)日益更新，新技術(shù)、新方法不斷涌現(xiàn)。生物化學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)已成為醫(yī)學(xué)科學(xué)研究的重要手段，在醫(yī)學(xué)、生物學(xué)各個(gè)領(lǐng)域中廣泛應(yīng)用。生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)已成為醫(yī)學(xué)、生物學(xué)各專業(yè)必修的實(shí)驗(yàn)課程。根據(jù)實(shí)驗(yàn)教學(xué)的需要，我校生物化學(xué)與分子生物學(xué)系自編《生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》，作為醫(yī)學(xué)各專業(yè)學(xué)習(xí)生物化學(xué)與分子生物學(xué)的配套實(shí)驗(yàn)教材，經(jīng)反復(fù)修改，多年使用，日益成熟。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展和實(shí)驗(yàn)教學(xué)模式的改變，現(xiàn)由我校福建省基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心教授生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)的教師，根據(jù)新的實(shí)驗(yàn)教學(xué)理念，在原書(shū)的基礎(chǔ)上重新編寫(xiě)。該書(shū)將實(shí)驗(yàn)技術(shù)分為基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn)、綜合性實(shí)驗(yàn)和研究性實(shí)驗(yàn)三部分。①基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn)：介紹最基本的實(shí)驗(yàn)操作和技能；②綜合性實(shí)驗(yàn)：選擇及重組實(shí)驗(yàn)，從多層次、整體介紹實(shí)驗(yàn)技術(shù)和方法；③研究性實(shí)驗(yàn)：開(kāi)展以學(xué)生為主體的初步科學(xué)研究實(shí)驗(yàn)，將研究方法引入實(shí)驗(yàn)過(guò)程。本教材以培養(yǎng)學(xué)生的三基為基礎(chǔ)，同時(shí)注重提高學(xué)生的創(chuàng)新能力和綜合素質(zhì)，通過(guò)整合實(shí)驗(yàn)，開(kāi)展綜合性、研究性實(shí)驗(yàn)，以擴(kuò)展學(xué)生的科研思維能力，提高分析和處理問(wèn)題的能力。本教材涵蓋了生物化學(xué)與分子生物學(xué)的基本實(shí)驗(yàn)方法和技術(shù)，是學(xué)習(xí)生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)獨(dú)立課程的一本實(shí)用教材。該書(shū)面向醫(yī)學(xué)本專科、碩士研究生各專業(yè)學(xué)生，適用于四、五年制臨床醫(yī)學(xué)、非臨床醫(yī)學(xué)各專業(yè)、七年制臨床醫(yī)學(xué)的實(shí)驗(yàn)教學(xué)，同時(shí)也可作為醫(yī)學(xué)專業(yè)研究生學(xué)習(xí)生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)的參考。本書(shū)在編寫(xiě)過(guò)程中，參編教師付出了辛勤的勞動(dòng)，許多實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員也給予了極大的支持，尤其是楊俐麗高級(jí)實(shí)驗(yàn)師對(duì)實(shí)驗(yàn)操作進(jìn)行認(rèn)真的核對(duì)，余文明實(shí)驗(yàn)師在插圖整理、文字錄入等方面做了大量工作。因此本書(shū)是集體的勞動(dòng)成果和智慧的結(jié)晶，對(duì)所有參加和支持本書(shū)編寫(xiě)的人員表示真誠(chéng)的謝意和崇高的敬意。由于水平有限，綜合性、研究性實(shí)驗(yàn)的編寫(xiě)模式又是新的嘗試，書(shū)中難免存在不妥之處，殷切希望廣大讀者對(duì)本書(shū)提出批評(píng)和建設(shè)性建議，以便今后不斷完善。

內(nèi)容概要

本書(shū)共分三篇：第一篇為基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn)，共五章，包括實(shí)驗(yàn)基本操作、分光光度法、層析技術(shù)、電泳技術(shù)、印跡技術(shù)等生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中最基本的實(shí)驗(yàn)技能；第二篇為綜合性實(shí)驗(yàn)，共五章，包括蛋白質(zhì)定量分析方法學(xué)（Lowry改良法、考馬斯亮藍(lán)法等），酶分離純化與動(dòng)力學(xué)分析，DNA提取、擴(kuò)增與測(cè)序，RNA提取與鑒定以及基因克隆等，通過(guò)綜合性實(shí)驗(yàn)介紹實(shí)驗(yàn)技術(shù)方法的應(yīng)用；第三篇為研究性實(shí)驗(yàn)，包括胰島素和腎上腺素對(duì)血糖和肝糖原的影響、血清r-球蛋白的分離純化與鑒定、青豌豆素的分離純化及其鑒定、外源基因在原核細(xì)胞的表達(dá)及蛋白質(zhì)與DNA的相互作用分析等。書(shū)中在闡明各類方法之基本原理的同時(shí)，注重實(shí)驗(yàn)的具體操作和實(shí)例的應(yīng)用。    本書(shū)適用于四、五年制臨床醫(yī)學(xué)、非臨床醫(yī)學(xué)各專業(yè)、七年制臨床醫(yī)學(xué)的實(shí)驗(yàn)教學(xué)，也可作為醫(yī)學(xué)?？?、碩士研究生各專業(yè)學(xué)生的實(shí)驗(yàn)教材，同時(shí)也供非醫(yī)學(xué)專業(yè)學(xué)生學(xué)習(xí)生物化學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)的參考。

書(shū)籍目錄

概述第一篇 基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn)  第一章 生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)基本操作  第二章 分光光度法    實(shí)驗(yàn)一 血清蛋白質(zhì)含量測(cè)定    實(shí)驗(yàn)二 DNA及RNA含量測(cè)定      實(shí)驗(yàn)三 血糖濃度測(cè)定    實(shí)驗(yàn)四 血清三酰甘油測(cè)定    實(shí)驗(yàn)五 血清總膽固醇含量的測(cè)定    實(shí)驗(yàn)六 血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）活性測(cè)定  第三章 層析技術(shù)    實(shí)驗(yàn)七 聚酰胺薄膜層析技術(shù)——蛋白質(zhì)及肽的N末端氨基酸DNS分析法    實(shí)驗(yàn)八 凝膠層析（分子篩層析法）分離蛋白質(zhì)    實(shí)驗(yàn)九 離子交換層析分離氨基酸    實(shí)驗(yàn)十 親和層析純化血清IgG  第四章 電泳技術(shù)    實(shí)驗(yàn)十一 血清蛋白乙酸纖維素薄膜電泳    實(shí)驗(yàn)十二 聚丙烯酰胺凝膠電泳分離血清蛋白    實(shí)驗(yàn)十三 聚丙烯酰胺凝膠電泳分離血清LDH    實(shí)驗(yàn)十四 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）測(cè)定蛋白質(zhì)分子量    實(shí)驗(yàn)十五 等電聚焦一聚丙烯酰胺凝膠平板電泳（IEF-PAGE）測(cè)定蛋白質(zhì)等電點(diǎn)    實(shí)驗(yàn)十六 DNA瓊脂糖凝膠電泳  第五章 印跡技術(shù)    實(shí)驗(yàn)十七 Southern印跡    實(shí)驗(yàn)十八 Northern印跡    實(shí)驗(yàn)十九 Western印跡    實(shí)驗(yàn)二十 非放射性Dig-dUTP標(biāo)記DNA探針及雜交檢測(cè)第二篇 綜合性實(shí)驗(yàn)  第六章 蛋白質(zhì)定量分析方法學(xué)比較    實(shí)驗(yàn)二十一 Lowry改良法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度    實(shí)驗(yàn)二十二 考馬斯亮藍(lán)法（Bradford法）測(cè)定蛋白質(zhì)濃度    實(shí)驗(yàn)二十三 BCA（二喹啉甲酸）法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度    實(shí)驗(yàn)二十四 紫外分光光度法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度  第七章 酶分離純化與動(dòng)力學(xué)分析    實(shí)驗(yàn)二十五 堿性磷酸酶分離純化及比活性測(cè)定    實(shí)驗(yàn)二十六 堿性磷酸酶初速度的測(cè)定    實(shí)驗(yàn)二十七 堿性磷酸酶Km值測(cè)定    實(shí)驗(yàn)二十八 pH、溫度及抑制劑對(duì)堿性磷酸酶活性的影響  第八章 DNA提取、擴(kuò)增與測(cè)序    實(shí)驗(yàn)二十九 質(zhì)粒DNA的提取    實(shí)驗(yàn)三十 基因組DNA的提取    實(shí)驗(yàn)三十一 聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）    實(shí)驗(yàn)三十二 DNA序列測(cè)定  第九章 RNA提取與鑒定    實(shí)驗(yàn)三十三 細(xì)胞RNA的提取    實(shí)驗(yàn)三十四 逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)（RT．PCR）    實(shí)驗(yàn)三十五 熒光定量PCR  第十章 基因克隆    實(shí)驗(yàn)三十六 目的基因與質(zhì)粒的限制性內(nèi)切酶消化    實(shí)驗(yàn)三十七 目的基因與質(zhì)粒DNA的連接    實(shí)驗(yàn)三十八 質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化和篩選第三篇 研究性實(shí)驗(yàn)  實(shí)驗(yàn)三十九 胰島素和腎上腺素對(duì)血糖和肝糖原的影響  實(shí)驗(yàn)四十 血清r-球蛋白的分離純化與鑒定  實(shí)驗(yàn)四十一 青豌豆素的分離純化及其鑒定  實(shí)驗(yàn)四十二 外源基因在原核細(xì)胞的表達(dá)  實(shí)驗(yàn)四十三 蛋白質(zhì)與DNA的相互作用分析參考文獻(xiàn)附錄

章節(jié)摘錄

插圖：概述一、實(shí)驗(yàn)特點(diǎn)生物化學(xué)與分子生物學(xué)是一門(mén)重要的實(shí)驗(yàn)性基礎(chǔ)學(xué)科，其理論與實(shí)驗(yàn)技術(shù)相輔相成，在整個(gè)生物化學(xué)及相關(guān)學(xué)科的發(fā)展上，都起著決定性的作用。生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)是實(shí)驗(yàn)性科學(xué)的重要組成，歸納起來(lái)，有如下特點(diǎn)：（1）生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)與其他學(xué)科互相滲透，在滲入其他學(xué)科的同時(shí)，也滲進(jìn)相關(guān)學(xué)科的理論知識(shí)和實(shí)驗(yàn)方法。（2）微量和定量是一大特點(diǎn)，因此要求有嚴(yán)格的條件，實(shí)驗(yàn)者必須有嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶?shí)驗(yàn)態(tài)度。（3）實(shí)驗(yàn)涉及生物大分子和生物材料的檢測(cè)。（4）新技術(shù)手段的不斷涌現(xiàn)，使生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)方法不斷發(fā)展并得到廣泛的應(yīng)用，而且推動(dòng)生物化學(xué)與分子生物學(xué)理論的發(fā)展。（5）與臨床密切聯(lián)系，為臨床檢測(cè)提供實(shí)驗(yàn)技術(shù)手段。二、實(shí)驗(yàn)須知（1）生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)有著獨(dú)特的實(shí)驗(yàn)技能和基本操作。學(xué)生應(yīng)本著認(rèn)真、積極的態(tài)度，在教師的指導(dǎo)下，完成每次實(shí)驗(yàn)。不僅要明白實(shí)驗(yàn)的原理、步驟和關(guān)鍵所在，還要能發(fā)現(xiàn)問(wèn)題，積累經(jīng)驗(yàn)，并對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果展開(kāi)討論。（2）課前認(rèn)真預(yù)習(xí)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，嚴(yán)格遵守操作規(guī)范。實(shí)驗(yàn)結(jié)果和數(shù)據(jù)應(yīng)如實(shí)、及時(shí)記錄，并當(dāng)場(chǎng)寫(xiě)出實(shí)驗(yàn)記錄，經(jīng)教師檢查同意并簽字后，方可離開(kāi)。實(shí)驗(yàn)報(bào)告應(yīng)在實(shí)驗(yàn)后一天內(nèi)完成并交到指定地點(diǎn)。（3）遵守課堂紀(jì)律，不得遲到早退，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不得吸煙、飲食、大聲喧嘩，學(xué)生之間應(yīng)互助友愛(ài)。（4）愛(ài)護(hù)實(shí)驗(yàn)器材。在了解儀器性能和操作規(guī)程之前，不得冒然使用，更不可擅自拆卸或?qū)⒉考С鍪彝?。?shí)驗(yàn)過(guò)程中，如發(fā)現(xiàn)儀器損壞或運(yùn)轉(zhuǎn)異常，應(yīng)立即妥善處理。（5）注意安全。對(duì)腐蝕性試劑或易燃有機(jī)溶劑的操作應(yīng)格外小心；水電煤氣在停用時(shí)應(yīng)及時(shí)關(guān)閉。

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