核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)及其應(yīng)用

前言

　　一直以來，病原微生物的體外培養(yǎng)是病原體診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”。據(jù)微生物學(xué)家的估計(jì)，采用目前的培養(yǎng)技術(shù)，僅有約1％的細(xì)菌可以培養(yǎng)。在過去的一個(gè)世紀(jì)里，以聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）為代表的基于核酸的檢測技術(shù)發(fā)展迅速，為其他病原體的精確檢測診斷提供了可能。毋庸置疑，Kary Mtlllis發(fā)明的PCR技術(shù)是20世紀(jì)80年代分子生物學(xué)領(lǐng)域的一項(xiàng)革命性突破。也許他本人當(dāng)時(shí)也沒有想到，PCR技術(shù)會(huì)在分子生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、法學(xué)等領(lǐng)域發(fā)揮如此重要的作用。經(jīng)過幾十年的改進(jìn)，PCR方法已從定性發(fā)展為定量，能夠在幾個(gè)小時(shí)內(nèi)，從幾個(gè)拷貝或單個(gè)細(xì)胞開始擴(kuò)增到數(shù)十億特異性的核酸片段，而且特異性也有了極大的提高。然而，從PCR技術(shù)的誕生之日起，它始終無法擺脫依賴精良儀器設(shè)備的局限，使得以PCR為基礎(chǔ)的核酸擴(kuò)增檢測技術(shù)無法更廣泛地推廣和應(yīng)用。　　基于這種強(qiáng)烈的需求，以核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)為基礎(chǔ)的檢測技術(shù)近年來得到了迅猛的發(fā)展。多種機(jī)制的等溫技術(shù)不僅誕生，而且有些技術(shù)已經(jīng)相當(dāng)成熟，完成了從實(shí)驗(yàn)室到實(shí)際應(yīng)用的過渡，正逐步在分子生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、法學(xué)等領(lǐng)域得到廣泛運(yùn)用。特別是在臨床和現(xiàn)場（point－of－care）快速診斷技術(shù)方面，核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)顯示了其突出的優(yōu)越性。更為重要的是，核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)由于不需要溫度變化的時(shí)間過程且擺脫了對精良儀器設(shè)備的依賴，使得我們對病原體的檢測診斷得以快速并高通量的實(shí)現(xiàn)。　　《核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)及其應(yīng)用》對當(dāng)今主要的等溫核酸擴(kuò)增技術(shù)進(jìn)行了總結(jié)，對這些技術(shù)的特點(diǎn)、原理及基本操作進(jìn)行了簡明的描述，同時(shí)也對各種方法的應(yīng)用進(jìn)行了概括。相信該書的出版發(fā)行將有助于該類技術(shù)的普及，推動(dòng)核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的創(chuàng)新和發(fā)展。

內(nèi)容概要

近年來核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)迅猛發(fā)展，顯現(xiàn)出廣闊的應(yīng)用前景。本書分為10章，第1章介紹核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的定義、特點(diǎn)與分類，并對該技術(shù)的發(fā)展概況進(jìn)行了論述。第2～9章分別介紹了各種方法的原理、操作要點(diǎn)及應(yīng)用范圍，幫助讀者了解各種方法的特點(diǎn)，并可進(jìn)行基本操作。第10章概述了相關(guān)企業(yè)及產(chǎn)品，分析了產(chǎn)業(yè)化的發(fā)展前景及對策。　  本書既有原理又有實(shí)驗(yàn)方法，適合從事分子生物學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、藥學(xué)、環(huán)境科學(xué)等學(xué)科的科研工作者學(xué)習(xí)使用。

書籍目錄

序前言1　概述　1.1　核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的定義及特點(diǎn)　1.2　核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的分類2　環(huán)介導(dǎo)的核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)　2.1  LAMP概述　2.2  LAMP技術(shù)原理　2.3  LAMP操作程序與技術(shù)要點(diǎn)　2.4  LAMP技術(shù)特點(diǎn)　2.5  LAMP技術(shù)的發(fā)展　2.6  LAMP技術(shù)的應(yīng)用　參考文獻(xiàn)3　自主序列復(fù)制與依賴于核酸序列的擴(kuò)增　3.1  3SR與NASBA概述　3.2  NASBA技術(shù)原理　3.3  NASBA操作程序與技術(shù)要點(diǎn)　3.4  NASBA技術(shù)特點(diǎn)　3.5  NASBA技術(shù)的發(fā)展　3.6  NASBA的應(yīng)用　參考文獻(xiàn)4　滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)　4.1  RCA概述　4.2  RCA技術(shù)原理　4.3  RCA操作程序與技術(shù)要點(diǎn)　4.4  RCA技術(shù)特點(diǎn)　4.5  RCA技術(shù)的發(fā)展與應(yīng)用　參考文獻(xiàn)5　單引物等溫?cái)U(kuò)增　5.1  SPIA概述  5.2  SPIA技術(shù)原理  5.3  SPIA操作程序與技術(shù)要點(diǎn)  5.4  SPIA技術(shù)特點(diǎn)  5.5  SPIA技術(shù)的發(fā)展與應(yīng)用  參考文獻(xiàn)6  依賴解旋酶的等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)　6.1  HDA概述　6.2  HDA反應(yīng)原理　6.3  HDA操作程序與技術(shù)要點(diǎn)　6.4  HDA技術(shù)特點(diǎn)　6.5  HDA技術(shù)的發(fā)展　6.6  HDA技術(shù)的應(yīng)用　參考文獻(xiàn)7  鏈替代擴(kuò)增　7.1  SDA概述　7.2  SDA反應(yīng)原理　7.3  SDA操作程序與技術(shù)要點(diǎn)　7.4  SDA技術(shù)特點(diǎn)　7.5  SDA技術(shù)的發(fā)展與應(yīng)用　參考文獻(xiàn)8  快速等溫檢測放大技術(shù)　8.1  RIDA概述　8.2  RIDA原理　8.3  RIDA操作程序和技術(shù)要點(diǎn)　8.4  RIDA技術(shù)特點(diǎn)　8.5  RIDA技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用　參考文獻(xiàn)9  切刻內(nèi)切酶核酸恒溫?cái)U(kuò)增　9.1  NEMA概述　9.2  NEMA原理　9.3  NEMA操作程序與技術(shù)要點(diǎn)　9.4  NEMA技術(shù)特點(diǎn)　9.5  NEMA的應(yīng)用　參考文獻(xiàn)10　核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)產(chǎn)業(yè)化的發(fā)展前景及對策分析

章節(jié)摘錄

　　以交流電源或電池為能源的加熱器可制成操作簡單、低成本、便攜式的儀器，這是普及核酸診斷試劑的前提。核酸恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)成為了優(yōu)思達(dá)公司的核心技術(shù)，與該公司的樣品處理和防污染核酸快速檢測裝置相結(jié)合，開發(fā)出適用于核酸現(xiàn)場（point of care）診斷以及邊遠(yuǎn)地區(qū)和基層醫(yī)療單位的快速檢測試劑，還可以廣泛地應(yīng)用于食品檢驗(yàn)、法醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、海關(guān)檢疫、環(huán)境檢測、公共衛(wèi)生防疫等領(lǐng)域。　　常見的免疫試紙條（金標(biāo)試紙條）大多用于檢測蛋白質(zhì)（抗體／抗原）。目前優(yōu)思達(dá)公司已經(jīng)開發(fā)出NEMA核酸試紙條，用于檢測DNA或：RNA，該技術(shù)也已申請了相關(guān)專利（專利申請?zhí)枺?006100034291）。該類產(chǎn)品提供了一種嶄新的核酸檢測手段，肉眼判讀，具有快速、簡單、靈敏、特異、無儀器等優(yōu)點(diǎn)。可與優(yōu)思達(dá)公司自主開發(fā)的樣品處理和核酸擴(kuò)增試劑配套使用，是優(yōu)思達(dá)獨(dú)創(chuàng)的近乎無儀器的基因診斷試劑的組成部分?！　⊥ㄓ眯秃怂嵩嚰垪l也可作為獨(dú)立的產(chǎn)品，為核酸擴(kuò)增產(chǎn)物提供方便而又準(zhǔn)確的檢測工具，適用于科研部門的核酸實(shí)驗(yàn)，臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的遺傳和感染性疾病普查，特別適用于現(xiàn)場（床邊）的快速診斷?！　⒑怂嵩嚰垪l裝人防污染核酸快速檢測裝置，配合優(yōu)思達(dá)防污染核酸擴(kuò)增診斷試劑一起使用，可以有效地防止實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增物的交叉污染，避免出現(xiàn)由于實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增物污染所造成的假陽性結(jié)果。

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