生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗技術(shù)教程

前言

本書的第一版分5章系統(tǒng)地講述了生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗技術(shù)理論，每一章后面有多個實驗，可供不同類型和層次的學(xué)校選做。這樣的結(jié)構(gòu)有利于將實驗課作為獨立的課程設(shè)置，全面提高學(xué)生的實驗技能，符合高等學(xué)校實驗課教學(xué)改革的潮流。此外，本書將生物化學(xué)實驗和分子生物學(xué)實驗融為一體，內(nèi)容力求全面，敘述力求簡明和通俗。因此，本書出版以來，被不少高等院校選作教材，得到廣大師生的好評。根據(jù)近幾年實驗課教學(xué)改革的情況，第二版在保留第一版特色的基礎(chǔ)上，主要做了以下的修改：1.為了使學(xué)生更全面地掌握生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗技術(shù)理論，特別是與生物化學(xué)制備相關(guān)的技術(shù)，在實驗技術(shù)理論部分增加了多糖和小分子活性成分的提取和分離，膜分離技術(shù)，提取物的濃縮、結(jié)晶和干燥，免疫分析技術(shù)等內(nèi)容。2.根據(jù)近幾年學(xué)科發(fā)展的狀況，補充和修改了部分內(nèi)容，如補充了基因芯片、實時定量PCR、用酵母細胞和昆蟲桿狀病毒表達外源基因、轉(zhuǎn)基因動植物、結(jié)構(gòu)基因組學(xué)、功能基因組學(xué)、生物信息學(xué)等內(nèi)容。3.為了使讀者更好地理解本書的有關(guān)內(nèi)容，增加了一些插圖。4.為滿足近幾年實驗課教學(xué)改革的需要，增加了第六章“綜合性實驗和設(shè)計性實驗”，敘述了開設(shè)綜合性實驗和設(shè)計性實驗的目標(biāo)、方法及設(shè)計性實驗的實施方案，編入6個難度適中的綜合性實驗。同時，在前5章的實驗部分，刪除了19個較難實施的或方法需要更新的實驗，增加了10個與生物化學(xué)制備有關(guān)的、較易實施的或方法被更新的實驗，擴大了實驗內(nèi)容的覆蓋面，更具先進性和實用性，全書的實驗項目總數(shù)由第一版的70個調(diào)整為67個。5.刪除第四章的“染色方法”一節(jié)，在附錄部分增加實驗數(shù)據(jù)的處理、常見生化物質(zhì)電泳后的染色方法、硫酸銨溶液飽和度計算表和換算轉(zhuǎn)速、相對離心力和轉(zhuǎn)子半徑的列線圖，以便讀者查閱。6.增加了參考書目。希望本書的第二版能更廣泛地被高等院校選作教材，在改革實驗課教學(xué)、提高學(xué)生的實驗技能方面發(fā)揮更好的作用。同時，希望本書第二版能作為廣大科技工作者的參考書，發(fā)揮更大的作用。

內(nèi)容概要

　　《生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗技術(shù)教程（第2版）》前5章按照實驗技術(shù)自身的體系，全面系統(tǒng)地講述了生物化學(xué)與分子生物學(xué)的實驗技術(shù)原理，并將61個難度不等的實驗按技術(shù)類別分列于5章中，可供不同條件的學(xué)校選做。第六章介紹了開設(shè)綜合性實驗和設(shè)計性實驗的目標(biāo)、方法及設(shè)計性實驗的實施方案，編入6個難度適中的綜合性實驗?！渡锘瘜W(xué)與分子生物學(xué)實驗技術(shù)教程（第2版）》適于用作教材，將生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗技術(shù)獨立設(shè)課，通過講解、操作結(jié)合的模式，對生命科學(xué)各專業(yè)本科生和部分專業(yè)碩士研究生進行系統(tǒng)的生物化學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)訓(xùn)練，也可供有關(guān)科技人員參考。

書籍目錄

第二版前言第一版前言第一章 生物化學(xué)與分子生物學(xué)中的定量分析第一節(jié) 滴定分析法一、基本原理二、標(biāo)準(zhǔn)溶液三、滴定分析的計算四、減小滴定誤差的方法第二節(jié) 紫外可見分光光度法一、基本原理二、分光光度計的主要部件三、分光光度法的定性和定量四、減小測定誤差的方法第三節(jié) 熒光分析法一、基本原理二、熒光儀的主要部件三、熒光分析法的定性和定量四、減小測量誤差的方法第四節(jié) 酶活力及動力學(xué)數(shù)據(jù)的測定一、酶活力的測定二、Km和Vmax的測定三、其他動力學(xué)數(shù)據(jù)的測定實驗1-1 粗脂肪的提取和定量測定實驗1-2 碘價的測定(Hanus法)實驗1-3 皂化價的測定實驗1-4 酸價的測定實驗1-5 脂肪乙酰價的測定實驗1-6 蛋白質(zhì)的測定(凱氏定氮法)實驗1-7 2，6-二氯酚靛酚法測定維生素C的含量實驗1-8 碘量法測定維生素C的含量實驗1-9 血糖定量測定(GOD-PAP法)實驗1-10 蒽酮比色定糖法實驗1-11 3，5-二硝基水楊酸法測定還原糖含量實驗1-12 血清膽固醇的定量測定(磷硫鐵法)實驗1-13 血清總膽固醇的測定(鄰苯二甲醛法)實驗1-14 雙縮脲法測定蛋白質(zhì)含量實驗1-15 Folin試劑法(Lowry法)測定蛋白質(zhì)含量實驗1-16 考馬斯亮藍染色法測定蛋白質(zhì)含量實驗1-17 紫外吸收法測定蛋白質(zhì)含量實驗1-18 紫外吸收法測定核酸含量實驗1-19 二苯胺顯色法測定DNA含量實驗1-20 地衣酚顯色法測定RNA含量實驗1-21 定磷法測定核酸含量實驗1-22 熒光法測定維生素B2含量實驗1-23 血清丙氨酸氨基移換酶(ALT)的測定實驗1-24 酸性磷酸酯酶的測定實驗1-25 堿性磷酸酶的反應(yīng)動力學(xué)性質(zhì)第二章 生物大分子的提取、沉淀和離心分離第一節(jié) 生物大分子的提取一、材料的選擇與處理二、確定測定方法三、細胞的破碎四、抽提第二節(jié) 沉淀分離技術(shù)一、蛋白質(zhì)的沉淀分離二、核酸的提取與沉淀分離三、多糖和小分子活性成分的提取和分離第三節(jié) 膜分離技術(shù)一、膜分離技術(shù)的分類二、膜的分類和性質(zhì)三、膜的特性四、透析五、微濾、超濾和反滲透第四節(jié) 提取物的濃縮、結(jié)晶和干燥一、濃縮二、結(jié)晶三、干燥第五節(jié) 離心分離技術(shù)一、離心機的種類與用途二、離心分離方法的選擇三、離心條件的確定四、離心操作的注意事項實驗2-1 香菇多糖的制備實驗2-2 卵磷脂的制備實驗2-3 大蒜細胞SOD的提取與分離實驗2-4 菜花(花椰菜)中核酸的分離和鑒定實驗2-5 酵母RNA的提取與分離實驗2-6 從肝臟中提取DNA實驗2-7 大腸桿菌細胞膜的分離實驗2-8 大鼠肝細胞核的分離第三章 層析技術(shù)第一節(jié) 吸附層析一、吸附柱層析二、聚酰胺薄膜層析第二節(jié) 分配層析一、概述二、紙層析第三節(jié) 凝膠層析一、基本原理二、凝膠的選擇三、操作第四節(jié) 離子交換層析一、基本原理二、離子交換劑三、操作第五節(jié) 親和層析一、配基與偶聯(lián)凝膠的選擇與處理二、親和層析的操作條件第六節(jié) 薄層層析一、支持劑的選擇與處理二、薄層板的制作三、層析方法第七節(jié) 氣相色譜一、基本原理二、氣相色譜的氣路系統(tǒng)三、色譜柱四、檢測器五、定性和定量方法第八節(jié) 高效液相色譜一、概述二、HPLC的特點三、HPLC的分類四、HPLC的儀器構(gòu)成五、定性定量方法實驗3-1 氨基酸的紙層析實驗3-2 微晶纖維素薄板層析法分離氨基酸實驗3-3 核苷酸的離子交換層析實驗3-4 DNS-氨基酸的聚酰胺薄膜層析實驗3-5 凝膠層析測定蛋白質(zhì)的Mr實驗3-6 胰蛋白酶的親和層析實驗3-7 醇酯成分的氣相層析實驗3-8 HPLC法測定生物類黃酮含量實驗3-9 HPLC法測定維生素A含量第四章 電泳技術(shù)第一節(jié) 基本原理一、泳動度二、影響泳動度的因素第二節(jié) 乙酸纖維素薄膜電泳第三節(jié) 瓊脂糖凝膠電泳一、瓊脂糖凝膠的特點二、DNA的瓊脂糖凝膠電泳三、印跡轉(zhuǎn)移電泳四、交變脈沖電場凝膠電泳第四節(jié) 聚丙烯酰胺凝膠電泳一、聚丙烯酰胺凝膠的特點二、凝膠聚合的原理及有關(guān)特性三、PAGE原理四、SDS-PAGE原理五、聚丙烯酰胺凝膠等電聚焦電泳原理六、聚丙烯酰胺凝膠雙向電泳原理第五節(jié) 高效毛細管電泳一、基本原理二、實驗方法三、分離類型及應(yīng)用第六節(jié) 免疫分析技術(shù)一、抗體的性質(zhì)和制備二、抗原抗體反應(yīng)實驗4-1 血清蛋白的乙酸纖維素薄膜電泳實驗4-2 垂直板PAGE分離血清蛋白實驗4-3 SDS-PAGE測定蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量實驗4-4 等電聚焦電泳測定血清蛋白質(zhì)等電點實驗4-5 DNA的瓊脂糖凝膠電泳實驗4-6 PAGE分離RNA實驗4-7 對流免疫電泳法測定胎兒甲種球蛋白實驗4-8 火箭免疫電泳法測定抗原含量第五章 分子生物學(xué)基本技術(shù)第一節(jié) DNA的體外合成一、DNA的化學(xué)合成二、聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)第二節(jié) 核酸的分子雜交一、探針的種類與選擇二、標(biāo)記物的選擇三、探針的放射性同位素標(biāo)記四、探針的非放射性標(biāo)記五、膜上印跡雜交的條件選擇六、雜交信號的檢測七、DNA芯片技術(shù)及應(yīng)用第三節(jié) 基因克隆一、目的基因的來源二、常用的克隆載體三、DNA分子的體外連接四、重組子導(dǎo)人受體細胞五、重組子的篩選六、基因組文庫的構(gòu)建七、cDNA文庫的構(gòu)建第四節(jié) 基因表達一、原核生物的表達載體二、用于原核細胞表達的外源基因三、提高表達水平的措施四、外源基因在酵母細胞中的表達五、外源基因在昆蟲桿狀病毒中的表達六、外源基因在哺乳動物細胞中的表達第五節(jié) 轉(zhuǎn)基因植物和轉(zhuǎn)基因動物一、轉(zhuǎn)基因植物二、轉(zhuǎn)基因動物第六節(jié) 基因組學(xué)的研究方法一、核酸的序列測定二、結(jié)構(gòu)基因組學(xué)三、功能基因組學(xué)第七節(jié) 轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究技術(shù)一、基因功能狀態(tài)的研究方法二、順式作用元件與反式作用因子的分析方法實驗5-1 植物基因組DNA的提取實驗5-2 動物基因組DNA的提取實驗5-3 細菌基因組DNA的提取實驗5-4 質(zhì)粒DNA的提取實驗5-5 大腸桿菌的轉(zhuǎn)化實驗5-6 質(zhì)粒DNA的酶切及電泳鑒定實驗5-7 質(zhì)粒DNA的分子雜交實驗5-8 使用光敏生物素探針的Southern雜交實驗5-9 DNA重組實驗5-10 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)實驗5-11 外源基因在大腸桿菌中的誘導(dǎo)表達第六章 綜合性實驗和設(shè)計性實驗實驗6-1 溶菌酶的分離純化實驗6-2 超氧化物歧化酶的分離純化和同工酶分析實驗6-3 利用PCR差異顯示mRNA實驗6-4 cDNA文庫的構(gòu)建實驗6-5 蛋白質(zhì)印跡分析實驗6-6 蛋白質(zhì)的雙向凝膠電泳附錄一 實驗數(shù)據(jù)的處理附錄二 調(diào)整硫酸銨溶液飽和度計算表（25℃）附錄三 換算轉(zhuǎn)速、相對離心力和轉(zhuǎn)子半徑的列線圖附錄四 常見生化物質(zhì)電泳后的染色方法附錄五 常用緩沖液的配制參考書目

章節(jié)摘錄

第一章 生物化學(xué)與分子生物學(xué)中的定量分析生命科學(xué)中的許多問題，要通過對物質(zhì)含量的測定來分析和探索，生物大分子的分離純化過程中，也經(jīng)常要對其含量進行分析和測定。生物化學(xué)與分子生物學(xué)中常用的定量分析方法主要有滴定分析法、分光光度法、熒光分析法、酶活測定法等。層析、電泳、分子雜交等技術(shù)，既可用于分離分析，又可用于含量測定，擬在其他章節(jié)介紹。放射性同位素技術(shù)主要用于分子雜交，免疫學(xué)技術(shù)主要用于免疫電泳和酶聯(lián)顯色，將在有關(guān)章節(jié)概要介紹其中與生物化學(xué)與分子生物學(xué)關(guān)系密切的部分內(nèi)容。第一節(jié) 滴定分析法一、基本原理（一）滴定分析法的概念“滴定”（titration）是將已知準(zhǔn)確濃度的溶液——標(biāo)準(zhǔn)溶液通過滴定管滴加到待測溶液中的過程。待“滴定”進行到化學(xué)反應(yīng)按計量關(guān)系完全作用為止，然后根據(jù)所用標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度和體積計算出待測物質(zhì)含量的分析方法稱為滴定分析法。因為這類方法是以測量標(biāo)準(zhǔn)溶液的容積為基礎(chǔ)的方法，故也稱為“容量分析法”（volumetric analysis）。滴定分析法具有快速準(zhǔn)確，操作簡便，儀器要求低的特點，相對誤差一般在0.2％以下，目前仍然是廣泛應(yīng)用的定量分析方法。

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《生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗技術(shù)教程(第2版)》為21世紀(jì)高等院校教材系列教材之一。

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