植物顯微技術(shù)

前言

　　本教材自1992年出版以來(lái)，我校及一些兄弟院校一直用作研究生教材，深受學(xué)生和同行的好評(píng)。盡管其間曾經(jīng)重印，但早已售罄，同行求購(gòu)詢(xún)問(wèn)不斷，因此我們?nèi)昵傲谐鲇?jì)劃，修訂再版此書(shū)?！　≈参镲@微技術(shù)是一門(mén)理論與實(shí)踐緊密結(jié)合的實(shí)驗(yàn)生物學(xué)課程。隨著生物學(xué)的發(fā)展及學(xué)科交叉與滲透，植物顯微技術(shù)不僅是經(jīng)典植物科學(xué)研究的必備技術(shù)，而且已成為現(xiàn)代植物功能基因組學(xué)、分子生物學(xué)、植物與微生物分子互作等研究的重要技術(shù)。因此，在修訂過(guò)程中，需要補(bǔ)充增加新內(nèi)容。為了探索積累經(jīng)驗(yàn)，近年來(lái)在學(xué)校研究生處的支持下，我們對(duì)該課程的教學(xué)體系、教學(xué)條件、教學(xué)內(nèi)容、教學(xué)方法等做了相應(yīng)的調(diào)整、充實(shí)和改革，以全面提高教學(xué)效果，幫助學(xué)生在理解實(shí)驗(yàn)原理的基礎(chǔ)上熟練掌握關(guān)鍵技術(shù)，培養(yǎng)學(xué)生獨(dú)立操作及分析問(wèn)題能力。這些嘗試和實(shí)踐為修訂再版這本教材奠定了基礎(chǔ)。

內(nèi)容概要

　　《植物顯微技術(shù)》是據(jù)編者近30年的教學(xué)、科研積累及實(shí)驗(yàn)技能整理而成。主要介紹了植物顯微技術(shù)中廣泛應(yīng)用和實(shí)用的內(nèi)容與方法，包括：植物制片技術(shù)（石蠟切片、半薄切片、冰凍切片、超薄切片、冰凍超薄切片、掃描電鏡樣品制備、木材切片）、原位雜交、原位PCR、植物組織化學(xué)、GUS及熒光檢測(cè)方法、細(xì)胞組織分離制片、整體透明技術(shù)、胚囊酶法分離技術(shù)、整體制片技術(shù)，顯微鏡的結(jié)構(gòu)、原理、使用和保養(yǎng)，顯微測(cè)量，專(zhuān)用顯微技術(shù)（熒光顯微術(shù)、相差顯微術(shù)、偏光顯微術(shù)、微分干涉顯微術(shù)、暗視野顯微術(shù)），以及攝影裝置和顯微攝影技術(shù)（微距攝影、體視顯微鏡攝影、顯微攝影）。全書(shū)圖文并茂，既論述了實(shí)驗(yàn)方法與原理，又突出了實(shí)驗(yàn)技術(shù)要點(diǎn)，并附有詳盡相關(guān)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)，便于教學(xué)安排及自學(xué)查閱?！　　吨参镲@微技術(shù)》可作為農(nóng)林院校植物生產(chǎn)類(lèi)研究生、本科生各專(zhuān)業(yè)的基本教材，亦可供綜合性大學(xué)、師范院校生物系師生及農(nóng)林科技工作者參考。

書(shū)籍目錄

第二版 前言代序第一版 前言第一篇 植物制片技術(shù)第一章 植物制片的目的和方法概述第一節(jié) 植物制片的目的、類(lèi)型和方法第二節(jié) 植物制片的一般流程一、一般制片的步驟二、石蠟制片的主要步驟三、半薄切片的主要步驟第三節(jié) 常用儀器、用具、藥品一、常用儀器二、常用實(shí)驗(yàn)用具三、常用文具四、藥品及染料的規(guī)格第四節(jié) 制片前的準(zhǔn)備工作一、玻璃器皿的清潔二、實(shí)驗(yàn)計(jì)劃、制片日程表第二章 石蠟制片法第一節(jié) 材料的選擇與分割一、取樣二、植物器官的分割三、染色體制片取樣第二節(jié) 固定與保存一、固定的原理和方法二、固定液三、固定操作步驟四、材料的沖洗五、固定時(shí)需要注意的問(wèn)題六、常用器具第三節(jié) 脫水一、脫水的目的二、常用的脫水劑及脫水與復(fù)水方法三、脫水時(shí)注意事項(xiàng)第四節(jié) 透明一、透明的目的二、常用的透明劑三、透明的方法第五節(jié) 浸蠟一、浸蠟的目的二、浸蠟方法和步驟第六節(jié) 包埋一、包埋劑二、石蠟的種類(lèi)三、石蠟的選擇四、各級(jí)石蠟的配制與包埋前的準(zhǔn)備五、包埋方法第七節(jié) 切片一、切片機(jī)、切片刀種類(lèi)及應(yīng)用二、切片機(jī)的組成與使用三、切片刀的準(zhǔn)備四、蠟塊的分割、修整與固著五、切片方法與步驟六、石蠟切片過(guò)程易出現(xiàn)的問(wèn)題及解決的辦法第八節(jié) 展片與粘片一、展片、粘片二、常用粘貼劑及其配制三、展片、粘片方法及注意事項(xiàng)第九節(jié) 脫蠟與透明一、脫蠟與透明二、石蠟制片中常用的脫蠟劑與透明劑3l三、脫蠟方法第十節(jié) 染料與染色一、染色的目的二、染料的分類(lèi)三、幾種常用染料的性質(zhì)及配制四、染色原理簡(jiǎn)介五、一般的染色方法六、染色注意事項(xiàng)第十一節(jié) 封藏一、封藏的目的二、封藏劑種類(lèi)三、封藏方法第三章 石蠟制片實(shí)例一、根尖縱切片制片法二、莖的縱、橫切片制片法三、葉橫切片制片法四、花芽縱切片制片法五、子房縱切片制片法六、花生子葉橫切片制片法七、線(xiàn)粒體制片法——雷加特氏法第四章 其他切片法第一節(jié) 徒手切片法一、徒手切片概述二、徒手切片實(shí)例第二節(jié) 冰凍切片法一、冰凍切片概述二、冰凍切片機(jī)三、冰凍切片方法5l四、冰凍切片注意事項(xiàng)第三節(jié) 滑走切片法一、滑走切片法概述5l二、滑走切片機(jī)組成與使用三、滑走切片法研究木材結(jié)構(gòu)注意事項(xiàng)四、滑走切片實(shí)例第五章 非切片制片法第一節(jié) 壓片、涂片制片法一、壓片、涂片制片方法及在植物學(xué)研究中的應(yīng)用二、壓片制片法三、涂片制片法第二節(jié) 整體制片法一、整體透明法二、蠶豆葉或鴨跖草葉表皮制片三、小麥葉表皮制片四、棉胚乳整體制片第三節(jié) 離析法一、木材解離制片二、胚囊酶法分離技術(shù)第六章 半薄切片、超薄切片與掃描電鏡樣品制備第一節(jié) 半薄切片和超薄切片法常用試劑一、幾種常用固定液的配制二、脫水劑三、滲透劑四、包埋劑五、常用染料第二節(jié) 半薄切片制樣方法一、半薄切片方法簡(jiǎn)介二、半薄切片制樣步驟三、半薄切片法在植物學(xué)研究中的應(yīng)用第三節(jié) 超薄切片制樣方法一、超薄切片制樣步驟二、超薄切片法在植物學(xué)研究中的應(yīng)用第四節(jié) 掃描電子顯微鏡樣品的制備一、整體樣品表面結(jié)構(gòu)觀(guān)察的制樣方法二、掃描電子顯微鏡制樣中的關(guān)鍵步驟三、掃描電子顯微鏡在植物學(xué)研究中的應(yīng)用第五節(jié) 冷凍超薄切片制樣方法簡(jiǎn)介一、冷凍超薄切片原理二、冷凍超薄切片方法三、低溫包埋技術(shù)四、冷凍超薄切片在植物學(xué)研究中的應(yīng)用第七章 原位雜交與組織化學(xué)第一節(jié) 原位雜交技術(shù)一、植物染色體原位雜交技術(shù)二、RNA原位雜交技術(shù)第二節(jié) 組織切片原位PCR一、原位PCR技術(shù)的基本原理二、基本類(lèi)型三、原位PCR基本步驟第三節(jié) 植物組織化學(xué)一、核酸的測(cè)定二、細(xì)胞內(nèi)含物的測(cè)定三、細(xì)胞壁物質(zhì)的測(cè)定第四節(jié) GUS及熒光檢測(cè)一、GUS組織化學(xué)染色二、免疫組織化學(xué)檢測(cè)三、非免疫熒光標(biāo)記第二篇 顯微鏡與顯微攝影技術(shù)第八章 顯微鏡第一節(jié) 顯微鏡基本知識(shí)一、顯微鏡的種類(lèi)二、透鏡成像的基本知識(shí)三、光路簡(jiǎn)介四、復(fù)式顯微鏡結(jié)構(gòu)原理五、顯微鏡的參數(shù)第二節(jié) 顯微鏡的結(jié)構(gòu)和性能一、光學(xué)系統(tǒng)二、機(jī)械部件三、推進(jìn)器和顯微測(cè)微尺四、顯微鏡的保養(yǎng)五、顯微鏡的維護(hù)第三節(jié) 幾種常用顯微鏡簡(jiǎn)介一、復(fù)式顯微鏡的原理、結(jié)構(gòu)與使用二、體視顯微鏡的原理、結(jié)構(gòu)與使用三、熒光顯微鏡的原理、結(jié)構(gòu)與使用四、倒置顯微鏡的原理、結(jié)構(gòu)與使用五、激光共聚焦顯微鏡簡(jiǎn)介六、電子顯微鏡的原理、結(jié)構(gòu)與使用第四節(jié) 幾種顯微技術(shù)的應(yīng)用一、熒光顯微術(shù)二、相差顯微術(shù)三、微分干涉術(shù)四、偏光顯微術(shù)五、暗視野顯微術(shù)第九章 顯微攝影成像裝置第一節(jié) 攝影和照相機(jī)的發(fā)展歷史一、攝影術(shù)的含義和發(fā)明二、照相機(jī)的發(fā)明和發(fā)展第二節(jié) 照相機(jī)的類(lèi)型和結(jié)構(gòu)一、照相機(jī)的類(lèi)型二、照相機(jī)的主要結(jié)構(gòu)第三節(jié) 照相機(jī)的使用方法一、曝光和曝光量二、調(diào)焦三、控制景深四、控制清晰度五、數(shù)碼相機(jī)簡(jiǎn)介六、CCD相機(jī)簡(jiǎn)介第十章 顯微攝影技術(shù)第一節(jié) 顯微攝影技術(shù)概論一、圖像采集二、圖像存儲(chǔ)三、圖像處理四、圖像轉(zhuǎn)換五、顯微成像技術(shù)的展望第二節(jié) 近距離攝影一、構(gòu)圖二、測(cè)光、曝光三、表現(xiàn)力四、近距離拍攝實(shí)例五、消費(fèi)型相機(jī)佳能Power Shot Prol結(jié)構(gòu)功能簡(jiǎn)介第三節(jié) 小物體（微距）攝影一、正確操控相機(jī)二、微距拍攝實(shí)例三、專(zhuān)業(yè)數(shù)碼單反相機(jī)Nikon D200結(jié)構(gòu)功能簡(jiǎn)介第四節(jié) 超微距攝影（解剖鏡攝影）一、超微距攝影裝置二、超微距攝影實(shí)例第五節(jié) 高倍率顯微攝影（顯微鏡攝影）一、高倍率顯微攝影裝置二、高倍率顯微攝影實(shí)例第六節(jié) 獲得高質(zhì)量顯微圖像與常見(jiàn)拍攝問(wèn)題分析一、相機(jī)握持的方式二、如何判別一張模糊的圖像三、顯微攝影采用的器材四、如何虛化背景、突出主體五、如何在暗弱光線(xiàn)下不使用閃光燈進(jìn)行拍照六、怎樣合理使用曝光補(bǔ)償七、如何微距拍攝具有大面積綠色葉片背景的小花八、怎樣正確使用相機(jī)的白平衡九、解剖鏡下（超微距）攝影如何調(diào)光十、高倍率顯微攝影如何正確調(diào)焦十一、Photoshop軟件后期處理時(shí)如何適度銳化十二、Photoshop軟件后期處理時(shí)如何去除數(shù)碼圖像陰霾第十一章 顯微圖像分析處理第一節(jié) 顯微圖像處理一、顯微圖像獲得的幾種方式二、圖像存儲(chǔ)格式三、圖像處理方法四、圖像輸出方式五、發(fā)表文章電子圖版的基本要求第二節(jié) 專(zhuān)業(yè)顯微圖像處理分析軟件一、SimplePCI軟件二、Image-Pro Plus（IPP）軟件三、MetaMorph（MM）軟件四、Cytogenetics細(xì)胞遺傳學(xué)工作站五、兩款免費(fèi)的專(zhuān)業(yè)顯微圖像分析軟件六、顯微圖像分析對(duì)硬件的基本要求第三篇 植物顯微技術(shù)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)一 石蠟制片法（一）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c原理二、實(shí)驗(yàn)材料三、實(shí)驗(yàn)試劑及用具四、操作步驟五、實(shí)驗(yàn)效果實(shí)驗(yàn)二 石蠟制片法（二）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c原理二、實(shí)驗(yàn)材料三、實(shí)驗(yàn)試劑及用具四、包埋的操作步驟五、包埋的效果實(shí)驗(yàn)三 石蠟制片法（三）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c原理二、實(shí)驗(yàn)材料三、實(shí)驗(yàn)試劑及用具四、操作步驟五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析實(shí)驗(yàn)四 石蠟制片法（四）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c原理二、實(shí)驗(yàn)材料三、實(shí)驗(yàn)試劑及用具四、操作步驟五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析實(shí)驗(yàn)五 半薄切片法一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c原理二、實(shí)驗(yàn)材料三、實(shí)驗(yàn)試劑及用具四、操作步驟實(shí)驗(yàn)六 超薄切片法一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c原理二、實(shí)驗(yàn)材料三、實(shí)驗(yàn)試劑及用具四、操作步驟五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)七 冰凍切片法一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c原理二、實(shí)驗(yàn)材料三、實(shí)驗(yàn)試劑及用具四、操作步驟五、冰凍切片實(shí)例：擬南芥花序軸橫切片六、冰凍切片法中影響樣品形態(tài)的問(wèn)題原因及解決方法實(shí)驗(yàn)八 原位雜交技術(shù)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c原理二、實(shí)驗(yàn)材料三、實(shí)驗(yàn)試劑及用具四、操作步驟五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)九 顯微鏡和顯微攝影（一）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c原理二、實(shí)驗(yàn)材料三、實(shí)驗(yàn)儀器四、操作步驟實(shí)驗(yàn)十 顯微鏡和顯微攝影（二）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c原理二、實(shí)驗(yàn)材料三、實(shí)驗(yàn)儀器四、操作步驟實(shí)驗(yàn)十一 顯微圖像分析處理的基本方法一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c原理二、實(shí)驗(yàn)材料三、實(shí)驗(yàn)儀器四、操作步驟附錄1 幾種常用的固定液附錄2 幾種常用的脫水劑及脫水方法附錄3 幾種常用的透明劑及透明方法附錄4 幾種常用的粘貼劑、封藏劑與包埋劑一、粘貼劑二、封藏劑三、包埋劑附錄5 幾種緩沖液的配制一、原位雜交用緩沖液的配制二、半薄切片用緩沖液的配制附錄6 幾種常用染料的性質(zhì)及配制一、染料二、常用染料染色對(duì)象主要參考文獻(xiàn)圖版

章節(jié)摘錄

　　第一章　植物制片的目的和方法概述　　制片技術(shù)是植物顯微技術(shù)課程的一個(gè)重要組成部分。它是從事植物生物技術(shù)、植物細(xì)胞學(xué)、結(jié)構(gòu)植物學(xué)、植物生殖生物學(xué)、植物發(fā)育生物學(xué)等研究的必要技術(shù)基礎(chǔ)。在植物營(yíng)養(yǎng)器官和生殖器官的形態(tài)發(fā)生、作物遺傳育種、分子鑒定、作物與病原菌互作、資源植物（含藥用植物）的鑒定和利用、林木材性鑒定等多方面的研究和教學(xué)工作中，都需要應(yīng)用植物制片技術(shù)。由于各種植物器官的性質(zhì)有差異以及研究目的不同，就需要不同的制片方法。制片技術(shù)在生物科學(xué)領(lǐng)域內(nèi)占有重要的地位，已成為生物學(xué)工作者常用的一門(mén)實(shí)驗(yàn)技術(shù)。近年來(lái)隨著功能基因組學(xué)、分子生物學(xué)研究的不斷深入，需要揭示基因在植物體的表達(dá)部位及在特定發(fā)育時(shí)期的作用，這就需要植物顯微技術(shù)與分子生物學(xué)技術(shù)結(jié)合。本章根據(jù)常用的植物制片基本原理及教學(xué)中行之有效的方法加以介紹?！　〉谝还?jié)　植物制片的目的、類(lèi)型和方法　　植物制片的目的：因?yàn)橹参矬w較大且不透明，不能直接在顯微鏡下觀(guān)察。要研究植物體的內(nèi)部結(jié)構(gòu)，一定要經(jīng)過(guò)特殊的處理，使材料減少厚度及體積，使光線(xiàn)透過(guò)樣品才能進(jìn)行顯微觀(guān)察。處理后的材料要求小而薄、完整、透明、保持原結(jié)構(gòu)，又具有顏色容易辨認(rèn)。要達(dá)到上述要求，就需要采取不同的制片方法?！　≈参镏破夹g(shù)很多，其中有些是不同技術(shù)的組合，如石蠟切片與化學(xué)或者生化技術(shù)結(jié)合形成組織化學(xué)技術(shù)、與免疫技術(shù)結(jié)合形成免疫組織化學(xué)技術(shù)、與分子生物學(xué)技術(shù)結(jié)合形成原位雜交技術(shù)、與計(jì)算機(jī)技術(shù)結(jié)合形成組織結(jié)構(gòu)的三維重建技術(shù)等。因此，植物制片技術(shù)是生物學(xué)研究中不可缺少的重要內(nèi)容。不論制片技術(shù)如何發(fā)展，對(duì)于初學(xué)者來(lái)說(shuō)，熟練掌握制片的基本技術(shù)是必要的，在此基礎(chǔ)上舉一反三，為學(xué)習(xí)其他實(shí)驗(yàn)技術(shù)打下基礎(chǔ)。

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