現(xiàn)代細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

前言

　　細(xì)胞生物學(xué)是所有生命科學(xué)的重要基礎(chǔ)學(xué)科。近二十多年來，細(xì)胞生物學(xué)發(fā)展迅速，其研究成果廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)各領(lǐng)域，成為現(xiàn)代生命科學(xué)的核心學(xué)科之一。掌握現(xiàn)代細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)和研究方法，對于從事生命科學(xué)基礎(chǔ)研究和應(yīng)用研究是十分必要的。　　隨著分子生物學(xué)等學(xué)科的迅速發(fā)展和滲透，細(xì)胞生物學(xué)的研究范疇不斷拓展，內(nèi)容不斷深化，新技術(shù)、新方法不斷涌現(xiàn)，推動著生命科學(xué)迅速發(fā)展。為了適應(yīng)當(dāng)今研究生、教師和科研工作者的需要，我們總結(jié)了參編人員十多年來細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)和科研工作經(jīng)驗(yàn)，在2001年出版的《細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)》（科學(xué)出版社）基礎(chǔ)上，進(jìn)行了重新編寫，保留了部分常用經(jīng)典實(shí)驗(yàn)，補(bǔ)充了大量當(dāng)前常用的細(xì)胞生物學(xué)新技術(shù)和新方法，力求保持本書的先進(jìn)性、可行性和實(shí)用性。由于本書定位于既可作為研究生《細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)》課程教材，又可作為高等院校教師、科研人員以及廣大研究生的實(shí)驗(yàn)工具書，因此編入的實(shí)驗(yàn)方法是當(dāng)前研究生科研工作中應(yīng)用較多并具有一定先進(jìn)性的實(shí)驗(yàn)方法，所選人的技術(shù)方法和實(shí)驗(yàn)材料力求體現(xiàn)簡易方便、多樣性和多層次性。本書適用于醫(yī)學(xué)院校、綜合性大學(xué)、師范、農(nóng)學(xué)院校的細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)教學(xué)，也可作為教師、研究生和科研人員的參考用書?！　”緯簿幦藢?shí)驗(yàn)119個，內(nèi)容涉及研究顯微鏡與顯微圖像分析技術(shù)、電子顯微鏡技術(shù)、細(xì)胞化學(xué)技術(shù)（細(xì)胞化學(xué)、酶、免疫、熒光細(xì)胞化學(xué)）、細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、培養(yǎng)細(xì)胞凋亡檢測技術(shù)、細(xì)胞與細(xì)胞器的分離技術(shù)、細(xì)胞融合技術(shù)、細(xì)胞的原位雜交技術(shù)、流式細(xì)胞術(shù)、真核細(xì)胞基因轉(zhuǎn)染與表達(dá)技術(shù)、哺乳動物基因敲除技術(shù)和干細(xì)胞與組織工程技術(shù)等。本書對每個實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的實(shí)驗(yàn)原理、技術(shù)方法以及注意事項(xiàng)都有充分的闡述，還附有大量圖表和彩色顯微照片，圖文并茂，以加深感性認(rèn)識。本書注重體現(xiàn)理論意義和實(shí)際應(yīng)用價值，編人的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目較多，讀者可根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件酌情參考?！　【凑埻泻蛯＜覍υ摃岢雠u和建議，我們將在今后的教學(xué)、科研中不斷補(bǔ)充和完善書的內(nèi)容，以適應(yīng)細(xì)胞生物學(xué)教學(xué)和科研的需要。　　編者　　山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)研究所　　2008年2月于濟(jì)南

內(nèi)容概要

　　《現(xiàn)代細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)》為高等院校研究生學(xué)習(xí)細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)用書，《現(xiàn)代細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)》共12章，涵蓋了細(xì)胞生物學(xué)經(jīng)典實(shí)驗(yàn)方法和當(dāng)今細(xì)胞生物學(xué)的一些新技術(shù)、新方法，既可用于研究生細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)教學(xué)，又可作為細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)工其書使用?！　　冬F(xiàn)代細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)》編人實(shí)驗(yàn)共119個，內(nèi)容涉及研究顯微鏡與顯微圖像分析技術(shù)、電子顯微鏡技術(shù)、細(xì)胞化學(xué)技術(shù)（細(xì)胞化學(xué)、酶、免疫、熒光細(xì)胞化學(xué)）、細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、培養(yǎng)細(xì)胞凋亡檢測技術(shù)、細(xì)胞融合技術(shù)、細(xì)胞與細(xì)胞器的分離技術(shù)、細(xì)胞的原位雜交技術(shù)、流式細(xì)胞術(shù)、真核細(xì)胞基因轉(zhuǎn)染與表達(dá)技術(shù)、哺乳動物基因敲除技術(shù)和干細(xì)胞與組織工程技術(shù)等內(nèi)容。　　《現(xiàn)代細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)》對每個實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的原理、技術(shù)方法及注意事項(xiàng)都有允分的闡述并附有大量彩色顯微照片，以加深感性認(rèn)識。《現(xiàn)代細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)》注重體現(xiàn)理論意義和實(shí)際應(yīng)用價值， 適用于生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、農(nóng)學(xué)、師范院校的教師、研究生以及科研人員使用。

作者簡介

　　辛華，中國人民大學(xué)文學(xué)博士、中國社會科學(xué)院經(jīng)濟(jì)學(xué)博士后，主攻文化經(jīng)濟(jì)和新經(jīng)濟(jì)研究。近年出版《艾豐評傳：一個記者能走多遠(yuǎn)》、《網(wǎng)戰(zhàn)》、《與傳媒界名流談心》、《傾聽傳媒論語》等書。

書籍目錄

前言第1章　研究顯微鏡與顯微圖像分析技術(shù)1.1　普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造和使用1.2　倒置相差顯微鏡的原理及使用1.3　熒光顯微鏡的原理及使用1.4　激光掃描共聚焦顯微鏡技術(shù)1.5　顯微操作技術(shù)1.5.1　體細(xì)胞顯微注射技術(shù)1.5.2　受精卵顯微注射技術(shù)1.6　活細(xì)胞熒光顯微成像技術(shù)1.7　細(xì)胞顯微圖像分析技術(shù)第2章　電鏡技術(shù)2.1　透射電鏡2.2　TEM樣品制備技術(shù)2.2.1　TEM超薄切片技術(shù)2.2.2　TEM負(fù)染色技術(shù)2.2.3　TEM細(xì)胞化學(xué)技術(shù)2.2.4　石蠟組織與石蠟切片的TEM樣品制備2.3　掃描電子顯微鏡2.4　SEM樣品制備2.4.1　常規(guī)SEM生物樣品制備2.4.2　SEM游離細(xì)胞制備2.4.3　SEM免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)第3章　細(xì)胞化學(xué)技術(shù)3.1　普通細(xì)胞化學(xué)3.1.1　細(xì)胞化學(xué)理論知識3.1.2　PAS（periodic acid Sehiff reaction）法顯示糖原3.1.3　蘇丹Ⅲ染色法顯示脂類3.1.4　酸性蛋白與堿性蛋白的顯示3.1.5　細(xì)胞骨架微絲蛋白的顯示3.1.6　Feulgen法顯示核酸3.1.7　甲基綠-派洛嚀法顯示核酸3.1.8　Giemsa染色法顯示染色質(zhì)/體3.1.9　蘇木精-伊紅染色顯示細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)3.2　酶細(xì)胞化學(xué)3.2.1　酶細(xì)胞化學(xué)的基本理論3.2.2　堿性磷酸酶顯示3.2.3　金屬沉淀法顯示酸性磷酸酶3.2.4　聯(lián)苯胺法顯示過氧化物酶3.2.5　通過琥珀酸脫氫酶活性進(jìn)行MTT法檢測細(xì)胞相對存活率3.3　免疫細(xì)胞化學(xué)用ABC方法來鑒定體外培養(yǎng)的小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞3.4　熒光細(xì)胞化學(xué)與免疫熒光細(xì)胞化學(xué)3.4.1　吖啶橙熒光染色法3.4.2　間接免疫熒光細(xì)胞化學(xué)法顯示細(xì)胞中的微管蛋白3.4.3　用雙重免疫熒光標(biāo)記法鑒定體外培養(yǎng)的小鼠神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞3.4.4　用雙重免疫熒光法鑒定組織切片中的兩種細(xì)胞的方法第4章　細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)4.1　細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理與技術(shù)4.1.1　細(xì)胞在體外生長的條件4.1.2　培養(yǎng)細(xì)胞常用設(shè)備和用品4.1.3　培養(yǎng)用品的清洗4.1.4　培養(yǎng)用品的滅菌與消毒4.1.5　無菌操作的基本要領(lǐng)和要求4.1.6　細(xì)胞培養(yǎng)用液4.2　細(xì)胞培養(yǎng)的方法4.2.1　原代細(xì)胞培養(yǎng)4.2.2　細(xì)胞傳代培養(yǎng)4.3　體外培養(yǎng)細(xì)胞的觀察方法4.3.1　培養(yǎng)細(xì)胞的生長特征與形態(tài)分型4.3.2　培養(yǎng)細(xì)胞固定、染色觀察的一般標(biāo)本制備4.3.3　細(xì)胞計數(shù)方法4.3.4　細(xì)胞的顯微測量4.4　培養(yǎng)細(xì)胞的凍存、復(fù)蘇與運(yùn)輸4.5　培養(yǎng)細(xì)胞增殖動力學(xué)方法4.5.1　生長曲線的測定4.5.2　分裂指數(shù)測定4.5.3　克隆（集落）形成試驗(yàn)4.5.4　BrdU摻入法測定細(xì)胞增殖指數(shù)4.6　腫瘤細(xì)胞黏附和侵襲能力的體外檢測方法4.6.1　腫瘤細(xì)胞的黏附能力分析實(shí)驗(yàn)4.6.2　細(xì)胞侵襲重建基底膜實(shí)驗(yàn)4.6.3　腫瘤細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)4.7　哺乳動物正常組織細(xì)胞的體外培養(yǎng)與應(yīng)用4.7.1　胎鼠大腦皮層神經(jīng)細(xì)胞的原代培養(yǎng)方法4.7.2　含藥血清對體外培養(yǎng)細(xì)胞的藥理實(shí)驗(yàn)4.7.3　四氯化碳致肝細(xì)胞損傷及SOD活性檢測第5章　培養(yǎng)細(xì)胞凋亡檢測技術(shù)5.1　光學(xué)顯微鏡形態(tài)學(xué)檢測5.1.1　臺盼藍(lán)染色法顯示凋亡細(xì)胞5.1.2　蘇木精-伊紅染色（HE染色）顯示凋亡細(xì)胞5.1.3　Giemsa染色法顯示凋亡細(xì)胞5.1.4　吖啶橙熒光染色顯示凋亡細(xì)胞5.1.5　Ho.33342與PI熒光雙染顯示凋亡與壞死細(xì)胞5.2　凋亡細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)觀察5.2.1　透射電鏡觀察凋亡細(xì)胞5.2.2　掃描電鏡觀察凋亡細(xì)胞5.3　凋亡細(xì)胞琥珀酸脫氫酶活性檢測（MTT法）5.4　DNA電泳檢測凋亡梯狀帶5.5　細(xì)胞膜磷脂酰絲氨酸熒光顯示5.6　凋亡細(xì)胞原位末端標(biāo)記第6章　細(xì)胞工程6.1　細(xì)胞融合6.1.1　聚乙二醇介導(dǎo)的細(xì)胞融合6.1.2　細(xì)胞電融合6.1.3　早熟染色體凝集的誘導(dǎo)和觀察6.2　細(xì)胞的分離6.2.1　淋巴細(xì)胞的分離純化6.2.2　死活細(xì)胞的分離6.3　細(xì)胞器的分離第7章　原位雜交技術(shù)7.1　地高辛標(biāo)記的原位雜交7.2　放射性同位素標(biāo)記的原位雜交7.3　胚胎整體原位雜交第8章　細(xì)胞化學(xué)成分的分離與測定8.1　蛋白質(zhì)SDS-PAGE凝膠電泳8.2　真核細(xì)胞基因組DNA的提取8.3　真核細(xì)胞RNA的提取8.4　免疫沉淀法分離并定量分析目的蛋白質(zhì)8.5　蛋白質(zhì)免疫印跡法8.6　蛋白質(zhì)雙向電泳分析細(xì)胞和組織中的蛋白質(zhì)群第9章　真核細(xì)胞基因轉(zhuǎn)染與表達(dá)技術(shù)9.1　DNA轉(zhuǎn)染技術(shù)9.1.1　磷酸鈣轉(zhuǎn)染技術(shù)9.1.2　脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)9.2　基因在細(xì)胞中表達(dá)的檢測技術(shù)9.2.1　DNA印跡雜交法9.2.2　RNA印跡雜交法9.2.3　蛋白印跡雜交法9.2.4　綠色熒光蛋白基因轉(zhuǎn)染及檢測第10章　哺乳動物基因敲除技術(shù)10.1　常用基因打靶載體的設(shè)計原則10.1.1　P21（wAFl）基因打靶載體的構(gòu)建10.1.2　C-Crk基因打靶載體的構(gòu)建10.1.3　視黃醇脫氫酶RDH15基因打靶載體的構(gòu)建10.2　胚胎干細(xì)胞基因敲除10.2.1　胚胎干細(xì)胞的增殖和維持10.2.2　胚胎干細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)電穿孔10.2.3　鑒定、篩選重組的胚胎干細(xì)胞10.3　嵌合體小鼠的制備10.3.1　嵌合體小鼠的產(chǎn)生10.3.2　GPI同工酶的水平淀粉凝膠電泳檢測嵌合體小鼠10.4　基因敲除小鼠的建立10.4.1　提取鼠尾DNA用PCR來檢測敲除基因第11章　干細(xì)胞和組織工程技術(shù)11.1　胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)與方法11.1.1　小鼠胚胎干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化11.1.2　人胚胎干細(xì)胞的分離和培養(yǎng)11.1.3　人類胚胎干細(xì)胞定向分化成神經(jīng)細(xì)胞11.2　成體干細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)與方法11.2.1　成人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)、純化及鑒定11.2.2　人造血干/祖細(xì)胞的體外培養(yǎng)與檢測技術(shù)11.2.3　大鼠胚胎腦神經(jīng)干細(xì)胞和祖細(xì)胞的分離培養(yǎng)11.3　神經(jīng)組織工程第12章　流式細(xì)胞術(shù)12.1　流式細(xì)胞儀的結(jié)構(gòu)、工作原理及應(yīng)用12.2　流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞膜受體（直標(biāo)法）12.3　流式細(xì)胞儀同時檢測細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外抗原12.4　流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡（PI單染色法）12.5　流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡和壞死（PI和Annexin V-FITC雙染色法）12.6　流式細(xì)胞儀檢測凋亡細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度變化圖版

章節(jié)摘錄

　　第3章　細(xì)胞化學(xué)技術(shù)　　細(xì)胞化學(xué)（cytochemistry）或組織化學(xué)（histochemistry）是生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)研究以及臨床診斷中不可缺少的重要的技術(shù)手段，是一門在保持組織、細(xì)胞原有生活結(jié)構(gòu)狀態(tài)及化學(xué)成分的基礎(chǔ)上，利用物理學(xué)、化學(xué)、免疫學(xué)、分子生物學(xué)等原理與技術(shù)，對組織與細(xì)胞內(nèi)的化學(xué)成分及其變化規(guī)律進(jìn)行定性、定位、定量研究的科學(xué)?！　∵@門科學(xué)最早創(chuàng)立于1826年，但早期的近100年進(jìn)展緩慢，至20世紀(jì)30年代才逐漸發(fā)展起來。1936年創(chuàng)立了酶組織化學(xué)，后來隨著電鏡和超薄切片技術(shù)的發(fā)明及細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)和分子生物學(xué)的迅速發(fā)展，組織化學(xué)技術(shù)手段不斷豐富、創(chuàng)新、發(fā)展，而成為現(xiàn)代細(xì)胞化學(xué)?，F(xiàn)代細(xì)胞化學(xué)包括經(jīng)典的細(xì)胞化學(xué)、酶細(xì)胞化學(xué)、免疫細(xì)胞化學(xué)、熒光細(xì)胞化學(xué)、電鏡細(xì)胞化學(xué)、細(xì)胞的原位雜交等。檢測儀器除了光學(xué)顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡外，還可使用顯微分光光度計、圖像分析儀、流式細(xì)胞儀及激光共聚焦顯微鏡等對組織細(xì)胞內(nèi)生物大分子進(jìn)行更精確的定性、定位、定量研究分析。這門科學(xué)除了對組織進(jìn)行研究外，對體外培養(yǎng)細(xì)胞、腹腔液細(xì)胞、血細(xì)胞等獨(dú)立存在的細(xì)胞也可以進(jìn)行研究分析。細(xì)胞化學(xué)這個概念已遠(yuǎn)遠(yuǎn)超越了早期原有的范圍，無論從理論、內(nèi)容、技術(shù)手段和研究范圍都比過去更廣泛、更深入。　　利用細(xì)胞化學(xué)技術(shù)可檢測動物、人等有機(jī)體的不同發(fā)育階段、不同組織部位及異常、生理、病理狀態(tài)下組織細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)或功能成分的表達(dá)及變化特點(diǎn)，從而研究個體發(fā)育過程中細(xì)胞增殖與分化，遺傳與發(fā)生機(jī)制以及疾病的病因、病理診斷等，隨著生命科學(xué)后基因組計劃的執(zhí)行，現(xiàn)代細(xì)胞化學(xué)已經(jīng)體現(xiàn)出它的重要價值。

編輯推薦

　　本書編入實(shí)驗(yàn)共119個，內(nèi)容涉及研究顯微鏡與顯微圖像分析技術(shù)、電子顯微鏡技術(shù)、細(xì)胞化學(xué)技術(shù)（細(xì)胞化學(xué)、酶、免疫、熒光細(xì)胞化學(xué)）、細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、培養(yǎng)細(xì)胞凋亡檢測技術(shù)、細(xì)胞融合技術(shù)、細(xì)胞與細(xì)胞器的分離技術(shù)、細(xì)胞的原位雜交技術(shù)、流式細(xì)胞術(shù)、真核細(xì)胞基因轉(zhuǎn)染與表達(dá)技術(shù)、哺乳動物基因敲除技術(shù)和干細(xì)胞與組織工程技術(shù)等。本書對每個實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的原理、技術(shù)方法及注意事項(xiàng)都有充分的闡述，并附有大量彩色顯微照片。

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