現(xiàn)代細胞生物學(xué)技術(shù)

前言

　　細胞生物學(xué)是所有生命科學(xué)的重要基礎(chǔ)學(xué)科。近二十多年來，細胞生物學(xué)發(fā)展迅速，其研究成果廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)各領(lǐng)域，成為現(xiàn)代生命科學(xué)的核心學(xué)科之一。掌握現(xiàn)代細胞生物學(xué)實驗技術(shù)和研究方法，對于從事生命科學(xué)基礎(chǔ)研究和應(yīng)用研究是十分必要的。　　隨著分子生物學(xué)等學(xué)科的迅速發(fā)展和滲透，細胞生物學(xué)的研究范疇不斷拓展，內(nèi)容不斷深化，新技術(shù)、新方法不斷涌現(xiàn)，推動著生命科學(xué)迅速發(fā)展。為了適應(yīng)當今研究生、教師和科研工作者的需要，我們總結(jié)了參編人員十多年來細胞生物學(xué)實驗教學(xué)和科研工作經(jīng)驗，在2001年出版的《細胞生物學(xué)實驗》（科學(xué)出版社）基礎(chǔ)上，進行了重新編寫，保留了部分常用經(jīng)典實驗，補充了大量當前常用的細胞生物學(xué)新技術(shù)和新方法，力求保持本書的先進性、可行性和實用性。由于本書定位于既可作為研究生《細胞生物學(xué)技術(shù)》課程教材，又可作為高等院校教師、科研人員以及廣大研究生的實驗工具書，因此編入的實驗方法是當前研究生科研工作中應(yīng)用較多并具有一定先進性的實驗方法，所選人的技術(shù)方法和實驗材料力求體現(xiàn)簡易方便、多樣性和多層次性。本書適用于醫(yī)學(xué)院校、綜合性大學(xué)、師范、農(nóng)學(xué)院校的細胞生物學(xué)技術(shù)教學(xué)，也可作為教師、研究生和科研人員的參考用書?！　”緯簿幦藢嶒?19個，內(nèi)容涉及研究顯微鏡與顯微圖像分析技術(shù)、電子顯微鏡技術(shù)、細胞化學(xué)技術(shù)（細胞化學(xué)、酶、免疫、熒光細胞化學(xué)）、細胞培養(yǎng)技術(shù)、培養(yǎng)細胞凋亡檢測技術(shù)、細胞與細胞器的分離技術(shù)、細胞融合技術(shù)、細胞的原位雜交技術(shù)、流式細胞術(shù)、真核細胞基因轉(zhuǎn)染與表達技術(shù)、哺乳動物基因敲除技術(shù)和干細胞與組織工程技術(shù)等。本書對每個實驗項目的實驗原理、技術(shù)方法以及注意事項都有充分的闡述，還附有大量圖表和彩色顯微照片，圖文并茂，以加深感性認識。本書注重體現(xiàn)理論意義和實際應(yīng)用價值，編人的實驗項目較多，讀者可根據(jù)實驗條件酌情參考?！　【凑埻泻蛯＜覍υ摃岢雠u和建議，我們將在今后的教學(xué)、科研中不斷補充和完善書的內(nèi)容，以適應(yīng)細胞生物學(xué)教學(xué)和科研的需要?！　【幷摺　∩綎|大學(xué)醫(yī)學(xué)院細胞生物學(xué)研究所　　2008年2月于濟南

內(nèi)容概要

　　《現(xiàn)代細胞生物學(xué)技術(shù)》為高等院校研究生學(xué)習細胞生物學(xué)技術(shù)用書，《現(xiàn)代細胞生物學(xué)技術(shù)》共12章，涵蓋了細胞生物學(xué)經(jīng)典實驗方法和當今細胞生物學(xué)的一些新技術(shù)、新方法，既可用于研究生細胞生物學(xué)技術(shù)教學(xué)，又可作為細胞生物學(xué)技術(shù)工其書使用。　　《現(xiàn)代細胞生物學(xué)技術(shù)》編人實驗共119個，內(nèi)容涉及研究顯微鏡與顯微圖像分析技術(shù)、電子顯微鏡技術(shù)、細胞化學(xué)技術(shù)（細胞化學(xué)、酶、免疫、熒光細胞化學(xué)）、細胞培養(yǎng)技術(shù)、培養(yǎng)細胞凋亡檢測技術(shù)、細胞融合技術(shù)、細胞與細胞器的分離技術(shù)、細胞的原位雜交技術(shù)、流式細胞術(shù)、真核細胞基因轉(zhuǎn)染與表達技術(shù)、哺乳動物基因敲除技術(shù)和干細胞與組織工程技術(shù)等內(nèi)容?！　　冬F(xiàn)代細胞生物學(xué)技術(shù)》對每個實驗項目的原理、技術(shù)方法及注意事項都有允分的闡述并附有大量彩色顯微照片，以加深感性認識。《現(xiàn)代細胞生物學(xué)技術(shù)》注重體現(xiàn)理論意義和實際應(yīng)用價值， 適用于生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、農(nóng)學(xué)、師范院校的教師、研究生以及科研人員使用。

作者簡介

　　辛華，中國人民大學(xué)文學(xué)博士、中國社會科學(xué)院經(jīng)濟學(xué)博士后，主攻文化經(jīng)濟和新經(jīng)濟研究。近年出版《艾豐評傳：一個記者能走多遠》、《網(wǎng)戰(zhàn)》、《與傳媒界名流談心》、《傾聽傳媒論語》等書。

書籍目錄

前言第1章　研究顯微鏡與顯微圖像分析技術(shù)1.1　普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造和使用1.2　倒置相差顯微鏡的原理及使用1.3　熒光顯微鏡的原理及使用1.4　激光掃描共聚焦顯微鏡技術(shù)1.5　顯微操作技術(shù)1.5.1　體細胞顯微注射技術(shù)1.5.2　受精卵顯微注射技術(shù)1.6　活細胞熒光顯微成像技術(shù)1.7　細胞顯微圖像分析技術(shù)第2章　電鏡技術(shù)2.1　透射電鏡2.2　TEM樣品制備技術(shù)2.2.1　TEM超薄切片技術(shù)2.2.2　TEM負染色技術(shù)2.2.3　TEM細胞化學(xué)技術(shù)2.2.4　石蠟組織與石蠟切片的TEM樣品制備2.3　掃描電子顯微鏡2.4　SEM樣品制備2.4.1　常規(guī)SEM生物樣品制備2.4.2　SEM游離細胞制備2.4.3　SEM免疫細胞化學(xué)技術(shù)第3章　細胞化學(xué)技術(shù)3.1　普通細胞化學(xué)3.1.1　細胞化學(xué)理論知識3.1.2　PAS（periodic acid Sehiff reaction）法顯示糖原3.1.3　蘇丹Ⅲ染色法顯示脂類3.1.4　酸性蛋白與堿性蛋白的顯示3.1.5　細胞骨架微絲蛋白的顯示3.1.6　Feulgen法顯示核酸3.1.7　甲基綠-派洛嚀法顯示核酸3.1.8　Giemsa染色法顯示染色質(zhì)/體3.1.9　蘇木精-伊紅染色顯示細胞核和細胞質(zhì)3.2　酶細胞化學(xué)3.2.1　酶細胞化學(xué)的基本理論3.2.2　堿性磷酸酶顯示3.2.3　金屬沉淀法顯示酸性磷酸酶3.2.4　聯(lián)苯胺法顯示過氧化物酶3.2.5　通過琥珀酸脫氫酶活性進行MTT法檢測細胞相對存活率3.3　免疫細胞化學(xué)用ABC方法來鑒定體外培養(yǎng)的小鼠星形膠質(zhì)細胞3.4　熒光細胞化學(xué)與免疫熒光細胞化學(xué)3.4.1　吖啶橙熒光染色法3.4.2　間接免疫熒光細胞化學(xué)法顯示細胞中的微管蛋白3.4.3　用雙重免疫熒光標記法鑒定體外培養(yǎng)的小鼠神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細胞3.4.4　用雙重免疫熒光法鑒定組織切片中的兩種細胞的方法第4章　細胞培養(yǎng)技術(shù)4.1　細胞培養(yǎng)的基本原理與技術(shù)4.1.1　細胞在體外生長的條件4.1.2　培養(yǎng)細胞常用設(shè)備和用品4.1.3　培養(yǎng)用品的清洗4.1.4　培養(yǎng)用品的滅菌與消毒4.1.5　無菌操作的基本要領(lǐng)和要求4.1.6　細胞培養(yǎng)用液4.2　細胞培養(yǎng)的方法4.2.1　原代細胞培養(yǎng)4.2.2　細胞傳代培養(yǎng)4.3　體外培養(yǎng)細胞的觀察方法4.3.1　培養(yǎng)細胞的生長特征與形態(tài)分型4.3.2　培養(yǎng)細胞固定、染色觀察的一般標本制備4.3.3　細胞計數(shù)方法4.3.4　細胞的顯微測量4.4　培養(yǎng)細胞的凍存、復(fù)蘇與運輸4.5　培養(yǎng)細胞增殖動力學(xué)方法4.5.1　生長曲線的測定4.5.2　分裂指數(shù)測定4.5.3　克?。洌┬纬稍囼?.5.4　BrdU摻入法測定細胞增殖指數(shù)4.6　腫瘤細胞黏附和侵襲能力的體外檢測方法4.6.1　腫瘤細胞的黏附能力分析實驗4.6.2　細胞侵襲重建基底膜實驗4.6.3　腫瘤細胞遷移實驗4.7　哺乳動物正常組織細胞的體外培養(yǎng)與應(yīng)用4.7.1　胎鼠大腦皮層神經(jīng)細胞的原代培養(yǎng)方法4.7.2　含藥血清對體外培養(yǎng)細胞的藥理實驗4.7.3　四氯化碳致肝細胞損傷及SOD活性檢測第5章　培養(yǎng)細胞凋亡檢測技術(shù)5.1　光學(xué)顯微鏡形態(tài)學(xué)檢測5.1.1　臺盼藍染色法顯示凋亡細胞5.1.2　蘇木精-伊紅染色（HE染色）顯示凋亡細胞5.1.3　Giemsa染色法顯示凋亡細胞5.1.4　吖啶橙熒光染色顯示凋亡細胞5.1.5　Ho.33342與PI熒光雙染顯示凋亡與壞死細胞5.2　凋亡細胞的超微結(jié)構(gòu)觀察5.2.1　透射電鏡觀察凋亡細胞5.2.2　掃描電鏡觀察凋亡細胞5.3　凋亡細胞琥珀酸脫氫酶活性檢測（MTT法）5.4　DNA電泳檢測凋亡梯狀帶5.5　細胞膜磷脂酰絲氨酸熒光顯示5.6　凋亡細胞原位末端標記第6章　細胞工程6.1　細胞融合6.1.1　聚乙二醇介導(dǎo)的細胞融合6.1.2　細胞電融合6.1.3　早熟染色體凝集的誘導(dǎo)和觀察6.2　細胞的分離6.2.1　淋巴細胞的分離純化6.2.2　死活細胞的分離6.3　細胞器的分離第7章　原位雜交技術(shù)7.1　地高辛標記的原位雜交7.2　放射性同位素標記的原位雜交7.3　胚胎整體原位雜交第8章　細胞化學(xué)成分的分離與測定8.1　蛋白質(zhì)SDS-PAGE凝膠電泳8.2　真核細胞基因組DNA的提取8.3　真核細胞RNA的提取8.4　免疫沉淀法分離并定量分析目的蛋白質(zhì)8.5　蛋白質(zhì)免疫印跡法8.6　蛋白質(zhì)雙向電泳分析細胞和組織中的蛋白質(zhì)群第9章　真核細胞基因轉(zhuǎn)染與表達技術(shù)9.1　DNA轉(zhuǎn)染技術(shù)9.1.1　磷酸鈣轉(zhuǎn)染技術(shù)9.1.2　脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)9.2　基因在細胞中表達的檢測技術(shù)9.2.1　DNA印跡雜交法9.2.2　RNA印跡雜交法9.2.3　蛋白印跡雜交法9.2.4　綠色熒光蛋白基因轉(zhuǎn)染及檢測第10章　哺乳動物基因敲除技術(shù)10.1　常用基因打靶載體的設(shè)計原則10.1.1　P21（wAFl）基因打靶載體的構(gòu)建10.1.2　C-Crk基因打靶載體的構(gòu)建10.1.3　視黃醇脫氫酶RDH15基因打靶載體的構(gòu)建10.2　胚胎干細胞基因敲除10.2.1　胚胎干細胞的增殖和維持10.2.2　胚胎干細胞標準電穿孔10.2.3　鑒定、篩選重組的胚胎干細胞10.3　嵌合體小鼠的制備10.3.1　嵌合體小鼠的產(chǎn)生10.3.2　GPI同工酶的水平淀粉凝膠電泳檢測嵌合體小鼠10.4　基因敲除小鼠的建立10.4.1　提取鼠尾DNA用PCR來檢測敲除基因第11章　干細胞和組織工程技術(shù)11.1　胚胎干細胞培養(yǎng)技術(shù)與方法11.1.1　小鼠胚胎干細胞的分離、培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化11.1.2　人胚胎干細胞的分離和培養(yǎng)11.1.3　人類胚胎干細胞定向分化成神經(jīng)細胞11.2　成體干細胞培養(yǎng)技術(shù)與方法11.2.1　成人骨髓基質(zhì)干細胞培養(yǎng)、純化及鑒定11.2.2　人造血干/祖細胞的體外培養(yǎng)與檢測技術(shù)11.2.3　大鼠胚胎腦神經(jīng)干細胞和祖細胞的分離培養(yǎng)11.3　神經(jīng)組織工程第12章　流式細胞術(shù)12.1　流式細胞儀的結(jié)構(gòu)、工作原理及應(yīng)用12.2　流式細胞儀檢測細胞膜受體（直標法）12.3　流式細胞儀同時檢測細胞內(nèi)和細胞外抗原12.4　流式細胞儀檢測細胞凋亡（PI單染色法）12.5　流式細胞儀檢測細胞凋亡和壞死（PI和Annexin V-FITC雙染色法）12.6　流式細胞儀檢測凋亡細胞內(nèi)游離鈣離子濃度變化圖版

章節(jié)摘錄

　　第3章　細胞化學(xué)技術(shù)　　細胞化學(xué)（cytochemistry）或組織化學(xué)（histochemistry）是生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)研究以及臨床診斷中不可缺少的重要的技術(shù)手段，是一門在保持組織、細胞原有生活結(jié)構(gòu)狀態(tài)及化學(xué)成分的基礎(chǔ)上，利用物理學(xué)、化學(xué)、免疫學(xué)、分子生物學(xué)等原理與技術(shù)，對組織與細胞內(nèi)的化學(xué)成分及其變化規(guī)律進行定性、定位、定量研究的科學(xué)。　　這門科學(xué)最早創(chuàng)立于1826年，但早期的近100年進展緩慢，至20世紀30年代才逐漸發(fā)展起來。1936年創(chuàng)立了酶組織化學(xué)，后來隨著電鏡和超薄切片技術(shù)的發(fā)明及細胞生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)和分子生物學(xué)的迅速發(fā)展，組織化學(xué)技術(shù)手段不斷豐富、創(chuàng)新、發(fā)展，而成為現(xiàn)代細胞化學(xué)?，F(xiàn)代細胞化學(xué)包括經(jīng)典的細胞化學(xué)、酶細胞化學(xué)、免疫細胞化學(xué)、熒光細胞化學(xué)、電鏡細胞化學(xué)、細胞的原位雜交等。檢測儀器除了光學(xué)顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡外，還可使用顯微分光光度計、圖像分析儀、流式細胞儀及激光共聚焦顯微鏡等對組織細胞內(nèi)生物大分子進行更精確的定性、定位、定量研究分析。這門科學(xué)除了對組織進行研究外，對體外培養(yǎng)細胞、腹腔液細胞、血細胞等獨立存在的細胞也可以進行研究分析。細胞化學(xué)這個概念已遠遠超越了早期原有的范圍，無論從理論、內(nèi)容、技術(shù)手段和研究范圍都比過去更廣泛、更深入。　　利用細胞化學(xué)技術(shù)可檢測動物、人等有機體的不同發(fā)育階段、不同組織部位及異常、生理、病理狀態(tài)下組織細胞內(nèi)結(jié)構(gòu)或功能成分的表達及變化特點，從而研究個體發(fā)育過程中細胞增殖與分化，遺傳與發(fā)生機制以及疾病的病因、病理診斷等，隨著生命科學(xué)后基因組計劃的執(zhí)行，現(xiàn)代細胞化學(xué)已經(jīng)體現(xiàn)出它的重要價值。

編輯推薦

　　本書編入實驗共119個，內(nèi)容涉及研究顯微鏡與顯微圖像分析技術(shù)、電子顯微鏡技術(shù)、細胞化學(xué)技術(shù)（細胞化學(xué)、酶、免疫、熒光細胞化學(xué)）、細胞培養(yǎng)技術(shù)、培養(yǎng)細胞凋亡檢測技術(shù)、細胞融合技術(shù)、細胞與細胞器的分離技術(shù)、細胞的原位雜交技術(shù)、流式細胞術(shù)、真核細胞基因轉(zhuǎn)染與表達技術(shù)、哺乳動物基因敲除技術(shù)和干細胞與組織工程技術(shù)等。本書對每個實驗項目的原理、技術(shù)方法及注意事項都有充分的闡述，并附有大量彩色顯微照片。

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