分子生物學及基因工程實驗教程

內容概要

　　《能力培養(yǎng)型生物學基礎課系列實驗教材：分子生物學及基因工程實驗教程》介紹了基本的、常用的分子生物學和基因工程實驗技術。全書分為三部分，第一部分為基礎性實驗，針對分子生物學基本實驗技能的培養(yǎng)，主要介紹一些短小獨立的分子生物學和基因工程基本實驗方案，由于每個實驗可在半日內完成，并且成功率較高，這些實驗特別適合于本科實驗教學的日程安排。第二部分為綜述性實驗，實驗略微復雜，適合于高年級本科生。第三部分為研究性實驗，實驗內容貼近科研工作，以培養(yǎng)獨立科研能力為主要目的?！　　赌芰ε囵B(yǎng)型生物學基礎課系列實驗教材：分子生物學及基因工程實驗教程》的實驗方法嚴謹可靠，可操作性強，不僅可以作為高等師范院校生命科學專業(yè)的本、專科學生實驗課程教材，也可供非師范院校相關專業(yè)的學生和生命科學工作者參考。

書籍目錄

第一部分　基礎性實驗實驗1　質粒的分離——堿性SDS法實驗2　Silica硅石粉法純化質粒實驗3　離心柱法提取質粒DNA實驗4　質粒的提取——煮沸法實驗5　核酸瓊脂糖凝膠電泳及“玻璃奶”法純化回收DNA片段實驗6　離心柱法回收瓊脂糖凝膠中DNA片段實驗7　DNA片段的連接（向質粒載體中插入外源DNA）實驗8　E.coLi感受態(tài)細胞的制備、轉化及轉化子的鑒定（藍白斑篩選法）實驗9　聚合酶鏈式反應（PCR）技術實驗10　菌落PCR方法快速篩選細菌重組子實驗11　重組子的插入方向鑒定（酶切法）實驗12　噬菌體鋪板實驗13　M13噬菌體DNA的提取實驗14　SDS法小量提取植物基因組DNA實驗15　CTAB法小量提取植物基因組DNA實驗16　動物組織細胞基因組DNA提取實驗17　血液基因組DNA的純化分離實驗18　Trizol試劑快速提取（動）植物總RNA實驗19　總RNA的變性瓊脂糖凝膠電泳檢測第二部分　綜合性實驗實驗20　反轉錄PCR實驗21　植物啟動子表達的組織特異性——β-葡萄糖醛酸糖苷酶（GUS）組織化學染色實驗22　外源基因在原核細胞中表達及分析——谷胱甘肽S-轉移酶融合蛋白質的表達及純化實驗23　外源基因在原核細胞中表達及分析——His6標記蛋白質的原核表達和純化實驗24　Western-blotting分析實驗25　高靈敏Western-blotting分析（化學發(fā)光法）第三部分　研究性實驗實驗26　地高辛標記探針的Southern雜交實驗27　菌落原位雜交實驗28　轉基因植物的PCR檢測實驗29　花序浸泡法轉化擬南芥及轉化子的篩選實驗30　葉盤法轉化煙草參考文獻

章節(jié)摘錄

　　第一部分　基礎性實驗　　實驗1　質粒的分離——堿性SDS法　　【實驗目的】　　1.學習堿法分離質粒的基本原理。　　2.掌握堿法分離質粒的操作方法?！　　緦嶒炘怼俊　≠|粒（plasmid）是染色體之外裸露的、具有自主復制能力的、以超螺旋狀態(tài)存在于細胞內的雙鏈DNA分子。質粒的分離是分子生物學研究中最基本的技術，目前提取質粒的方法很多，比如CsC1梯度離心法、煮沸法、硅石粉法、堿性SDS法等。本實驗所用的堿性SDS法（簡稱堿法）是一種經典的分離質粒DNA的方法，其基本原理是利用染色體DNA與質粒DNA在變性程度和復性速度差異，即在pH>12的堿性條件下，大腸桿菌的線性染色體由于氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性，但在該條件下，質粒由于其共價閉合環(huán)狀超螺旋結構特點，兩條互補鏈間的氫鍵沒有完全破壞，兩條鏈仍然部分地結合在一起，當將溶液的pH調至中性時，質粒DNA會快速復性，染色體DNA則由于分子很大，難以復性，在高鹽溶液中，變性的染色體DNA相互纏繞，形成不溶性DNA－蛋白質－SDS大分子復合體，與細胞碎片一起被離心除去，而質粒DNA存留在上清液中，可用異丙醇或乙醇沉淀上清溶液中的質粒DNA，獲得純度較高的質粒。　　【實驗器材、材料與試劑】　　1.器材　　恒溫搖床、超凈工作臺、高壓滅菌鍋、高速臺式離心機、微量取液器、Tip頭、1.5 ml Eppendorf管?！　?.材料　　含pUC18質粒的大腸桿菌DH5a或JM109菌株。　　3.試劑　?。?）LB液體培養(yǎng)基　　稱取胰蛋白質胨10g、酵母提取物5g、NaCl 10g溶于950ml水中，用0.4 mol／LNaOH調節(jié)pH至7.0，定容至1L，高溫高壓滅菌?！　　?/pre>




編輯推薦
　　《能力培養(yǎng)型生物學基礎課系列實驗教材：分子生物學及基因工程實驗教程》是“生物學基礎課系列實驗教材”之一，全書共分3個部分，收錄了30個實驗，對基本的、常用的分子生物學和基因工程實驗技術作了系統(tǒng)介紹。具體包括Silica硅石粉法純化質粒、聚合酶鏈式反應（PCR）技術、動物組織細胞基因組DNA提取、反轉錄PCR、地高辛標記探針的Southern雜交等。該書可供各大專院校作為教材使用，也可供從事相關工作的人員作為參考用書使用。





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