分子生物學(xué)及基因工程實(shí)驗(yàn)教程

內(nèi)容概要

　　《能力培養(yǎng)型生物學(xué)基礎(chǔ)課系列實(shí)驗(yàn)教材：分子生物學(xué)及基因工程實(shí)驗(yàn)教程》介紹了基本的、常用的分子生物學(xué)和基因工程實(shí)驗(yàn)技術(shù)。全書分為三部分，第一部分為基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn)，針對(duì)分子生物學(xué)基本實(shí)驗(yàn)技能的培養(yǎng)，主要介紹一些短小獨(dú)立的分子生物學(xué)和基因工程基本實(shí)驗(yàn)方案，由于每個(gè)實(shí)驗(yàn)可在半日內(nèi)完成，并且成功率較高，這些實(shí)驗(yàn)特別適合于本科實(shí)驗(yàn)教學(xué)的日程安排。第二部分為綜述性實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)略微復(fù)雜，適合于高年級(jí)本科生。第三部分為研究性實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)內(nèi)容貼近科研工作，以培養(yǎng)獨(dú)立科研能力為主要目的?！　　赌芰ε囵B(yǎng)型生物學(xué)基礎(chǔ)課系列實(shí)驗(yàn)教材：分子生物學(xué)及基因工程實(shí)驗(yàn)教程》的實(shí)驗(yàn)方法嚴(yán)謹(jǐn)可靠，可操作性強(qiáng)，不僅可以作為高等師范院校生命科學(xué)專業(yè)的本、?？茖W(xué)生實(shí)驗(yàn)課程教材，也可供非師范院校相關(guān)專業(yè)的學(xué)生和生命科學(xué)工作者參考。

書籍目錄

第一部分　基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)1　質(zhì)粒的分離——堿性SDS法實(shí)驗(yàn)2　Silica硅石粉法純化質(zhì)粒實(shí)驗(yàn)3　離心柱法提取質(zhì)粒DNA實(shí)驗(yàn)4　質(zhì)粒的提取——煮沸法實(shí)驗(yàn)5　核酸瓊脂糖凝膠電泳及“玻璃奶”法純化回收DNA片段實(shí)驗(yàn)6　離心柱法回收瓊脂糖凝膠中DNA片段實(shí)驗(yàn)7　DNA片段的連接（向質(zhì)粒載體中插入外源DNA）實(shí)驗(yàn)8　E.coLi感受態(tài)細(xì)胞的制備、轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)化子的鑒定（藍(lán)白斑篩選法）實(shí)驗(yàn)9　聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)實(shí)驗(yàn)10　菌落PCR方法快速篩選細(xì)菌重組子實(shí)驗(yàn)11　重組子的插入方向鑒定（酶切法）實(shí)驗(yàn)12　噬菌體鋪板實(shí)驗(yàn)13　M13噬菌體DNA的提取實(shí)驗(yàn)14　SDS法小量提取植物基因組DNA實(shí)驗(yàn)15　CTAB法小量提取植物基因組DNA實(shí)驗(yàn)16　動(dòng)物組織細(xì)胞基因組DNA提取實(shí)驗(yàn)17　血液基因組DNA的純化分離實(shí)驗(yàn)18　Trizol試劑快速提取（動(dòng)）植物總RNA實(shí)驗(yàn)19　總RNA的變性瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)第二部分　綜合性實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)20　反轉(zhuǎn)錄PCR實(shí)驗(yàn)21　植物啟動(dòng)子表達(dá)的組織特異性——β-葡萄糖醛酸糖苷酶（GUS）組織化學(xué)染色實(shí)驗(yàn)22　外源基因在原核細(xì)胞中表達(dá)及分析——谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶融合蛋白質(zhì)的表達(dá)及純化實(shí)驗(yàn)23　外源基因在原核細(xì)胞中表達(dá)及分析——His6標(biāo)記蛋白質(zhì)的原核表達(dá)和純化實(shí)驗(yàn)24　Western-blotting分析實(shí)驗(yàn)25　高靈敏Western-blotting分析（化學(xué)發(fā)光法）第三部分　研究性實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)26　地高辛標(biāo)記探針的Southern雜交實(shí)驗(yàn)27　菌落原位雜交實(shí)驗(yàn)28　轉(zhuǎn)基因植物的PCR檢測(cè)實(shí)驗(yàn)29　花序浸泡法轉(zhuǎn)化擬南芥及轉(zhuǎn)化子的篩選實(shí)驗(yàn)30　葉盤法轉(zhuǎn)化煙草參考文獻(xiàn)

章節(jié)摘錄

　　第一部分　基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn)　　實(shí)驗(yàn)1　質(zhì)粒的分離——堿性SDS法　　【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹俊　?.學(xué)習(xí)堿法分離質(zhì)粒的基本原理。　　2.掌握堿法分離質(zhì)粒的操作方法?！　　緦?shí)驗(yàn)原理】　　質(zhì)粒（plasmid）是染色體之外裸露的、具有自主復(fù)制能力的、以超螺旋狀態(tài)存在于細(xì)胞內(nèi)的雙鏈DNA分子。質(zhì)粒的分離是分子生物學(xué)研究中最基本的技術(shù)，目前提取質(zhì)粒的方法很多，比如CsC1梯度離心法、煮沸法、硅石粉法、堿性SDS法等。本實(shí)驗(yàn)所用的堿性SDS法（簡(jiǎn)稱堿法）是一種經(jīng)典的分離質(zhì)粒DNA的方法，其基本原理是利用染色體DNA與質(zhì)粒DNA在變性程度和復(fù)性速度差異，即在pH>12的堿性條件下，大腸桿菌的線性染色體由于氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)而變性，但在該條件下，質(zhì)粒由于其共價(jià)閉合環(huán)狀超螺旋結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，兩條互補(bǔ)鏈間的氫鍵沒(méi)有完全破壞，兩條鏈仍然部分地結(jié)合在一起，當(dāng)將溶液的pH調(diào)至中性時(shí)，質(zhì)粒DNA會(huì)快速?gòu)?fù)性，染色體DNA則由于分子很大，難以復(fù)性，在高鹽溶液中，變性的染色體DNA相互纏繞，形成不溶性DNA－蛋白質(zhì)－SDS大分子復(fù)合體，與細(xì)胞碎片一起被離心除去，而質(zhì)粒DNA存留在上清液中，可用異丙醇或乙醇沉淀上清溶液中的質(zhì)粒DNA，獲得純度較高的質(zhì)粒?！　　緦?shí)驗(yàn)器材、材料與試劑】　　1.器材　　恒溫?fù)u床、超凈工作臺(tái)、高壓滅菌鍋、高速臺(tái)式離心機(jī)、微量取液器、Tip頭、1.5 ml Eppendorf管?！　?.材料　　含pUC18質(zhì)粒的大腸桿菌DH5a或JM109菌株?！　?.試劑　?。?）LB液體培養(yǎng)基　　稱取胰蛋白質(zhì)胨10g、酵母提取物5g、NaCl 10g溶于950ml水中，用0.4 mol／LNaOH調(diào)節(jié)pH至7.0，定容至1L，高溫高壓滅菌?！　　?/pre>




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　　《能力培養(yǎng)型生物學(xué)基礎(chǔ)課系列實(shí)驗(yàn)教材：分子生物學(xué)及基因工程實(shí)驗(yàn)教程》是“生物學(xué)基礎(chǔ)課系列實(shí)驗(yàn)教材”之一，全書共分3個(gè)部分，收錄了30個(gè)實(shí)驗(yàn)，對(duì)基本的、常用的分子生物學(xué)和基因工程實(shí)驗(yàn)技術(shù)作了系統(tǒng)介紹。具體包括Silica硅石粉法純化質(zhì)粒、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)、動(dòng)物組織細(xì)胞基因組DNA提取、反轉(zhuǎn)錄PCR、地高辛標(biāo)記探針的Southern雜交等。該書可供各大專院校作為教材使用，也可供從事相關(guān)工作的人員作為參考用書使用。





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