分子生物學(xué)與基因組學(xué)

內(nèi)容概要

目前，實(shí)驗(yàn)室人員面臨的一大困惑是如何運(yùn)用正確的工具和方法來(lái)闡釋基因組所編碼的相關(guān)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，功能和表達(dá)解釋。德國(guó)馬爾堡大學(xué)的 Muelhardt所著的《分子生物學(xué)與基因組學(xué)》為大家提供了很多有益的實(shí)驗(yàn)室小竅門(mén)和技巧，能夠大大提高實(shí)驗(yàn)的成功率和準(zhǔn)確性。這本實(shí)驗(yàn)室指南簡(jiǎn)單明快地介紹了分子生物學(xué)和基因組學(xué)中所涉及的各種現(xiàn)代方法和各種常規(guī)方法，并討論了每種方法的優(yōu)點(diǎn)和不足?！　∽鳛椤皩?shí)驗(yàn)者”系列中的一本，本書(shū)秉承了叢書(shū)一貫的風(fēng)格，依然是一本非常實(shí)用的實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)，以簡(jiǎn)捷明快的風(fēng)格，用100多個(gè)圖表，為廣大的分子生物學(xué)和基因組學(xué)實(shí)驗(yàn)室工作人員提供了大量的實(shí)用小貼士來(lái)補(bǔ)充和完善基礎(chǔ)知識(shí)，從而大大提高實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和成功率。　　本書(shū)適合分子生物學(xué)和基因組學(xué)領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)室工作人員、科研工作者、教師和高年級(jí)本科生、研究生使用。

書(shū)籍目錄

引言第一版前言致謝1 什么是分子生物學(xué)？　1.1 分子生物學(xué)基礎(chǔ)知識(shí)：讓初學(xué)者認(rèn)識(shí)分子世界　1.2 分子生物學(xué)基本要求　1.3 實(shí)驗(yàn)室安全2 基本方法介紹　2.1 核酸的差異　2.2 核酸沉淀濃縮　　2.2.1 乙醇沉淀法　　2.2.2 濃縮裝置　　2.2.3 冷凍干燥　　2.2.4 鹽析　2.3 核酸純化　　2.3.1 酚氯仿抽提純化法　　2.3.2 聚乙二醇沉淀法　　2.3.3 蛋白結(jié)合濾膜純化法　　2.3.4 陰離子交換柱純化法　　2.3.5 玻璃乳純化法　　2.3.6 氯化銫密度梯度離心法　　2.3.7 透析法　2.4 核酸濃度測(cè)定　　2.4.1 分光光度計(jì)法　　2.4.2 瓊脂糖凝膠電泳法　　2.4.3 點(diǎn)量化法　　2.4.4 熒光定量法　　2.4.5 核酸檢測(cè)計(jì)法　　2.4.6 酶標(biāo)志法　2.5 DNA制備方法　　2.5.1 質(zhì)粒DNA的小量制備　　2.5.2 質(zhì)粒DNA的大量制備　　2.5.3 細(xì)菌培養(yǎng)基　　2.5.4 噬菌體DNA的制備　　2.5.5 利用輔助噬茵體制備單鏈DNA　　2.5.6 基因組DNA制備3 分子生物學(xué)工具　3.1 限制性酶　　3.1.1 命名法　　3.1.2 活性測(cè)定　　3.1.3 限制性酶切反應(yīng)　　3.1.4 限制性酶切難點(diǎn)　　3.1.5 限制性酶切指南　3.2 凝膠　　3.2.1 瓊脂糖凝膠　　3.2.2 瓊脂糖凝膠中的DNA片段回收　　3.2.3 聚丙烯酰胺凝膠　　3.2.4 聚丙烯酰胺凝膠中的DNA片段回收　　3.2.5 脈沖場(chǎng)凝膠電泳　　3.2.6 毛細(xì)管電泳　3.3 印跡法　　3.3.1 Sotlthern印跡法　　3.3.2 Northern印跡法　　3.3.3 點(diǎn)印跡法和縫印跡法4 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)　4.1 標(biāo)準(zhǔn)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)　4.2 改進(jìn)的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)　　4.2.1 巢式聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)　　4.2.2 多重聚合酶鏈反應(yīng)　　4.2.3 長(zhǎng)片段聚合酶鏈反應(yīng)　4.3 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的應(yīng)用　　4.3.1 反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)　　4.3.2 cDNA末端的快速擴(kuò)增　　4.3.3 相同產(chǎn)物擴(kuò)增　　4.3.4 經(jīng)典定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)　　4.3.5 實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)　　4.3.6 反向聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)　　4.3.7 Biotin—RAGE聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)　　4.3.8 改良引物誘變　　4.3.9 擴(kuò)增阻滯突變系統(tǒng)　　4.3.10 原位聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)　　4.3.11 循環(huán)測(cè)序　　4.3.12 cDNA合成　　4.3.13 單細(xì)胞聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)5 RNA　5.1 RNA酶滅活　5.2 RNA提取方法　　5.2.1 一步法　　5.2.2 乙基苯基聚乙二醇裂解法　　5.2.3 基本信息　　5.2.4 RNA濃度測(cè)定　5.3 mRNA分離方法　　5.3.1 購(gòu)買RNA　5.4 逆轉(zhuǎn)錄：cDNA合成　5.5 體外轉(zhuǎn)錄：RNA合成　5.6 RNA干擾6 克隆DNA片段　6.1 克隆的基本要素　　6.1.1 載體　　6.1.2 DNA片段　　6.1.3 補(bǔ)平反應(yīng)　　6.1.4 DNA定量　　6.1.5 連接　　6.1.6 克隆PCR產(chǎn)物　　6.1.7 用重組酶體系克隆　6.2 選擇克隆載體　　6.2.1 質(zhì)?！　?.2.2 噬菌體　　6.2.3 柯斯質(zhì)?！　?.2.4 P1人工染色體及細(xì)菌人工染色體　　6.2.5 酵母人工染色體　6.3 選擇細(xì)菌　6.4 制備感受態(tài)細(xì)胞與轉(zhuǎn)化　　6.4.1 氯化鈣法　　6.4.2 氯化銣法　　6.4.3 TSS法　　6.4.4 電轉(zhuǎn)　　6.4.5 效價(jià)檢測(cè)　6.5 克隆的相關(guān)問(wèn)題　6.6 克隆的保存7 雜交：如何檢測(cè)到DNA　7.1 制備探針　　7.1.1 制備標(biāo)記探針的方法　7.2 雜交　　7.2.1 雜交緩沖液　　7.2.2 雜交反應(yīng)體系　　7.2.3 雜交溫度　　7.2.4 洗滌　7.3 標(biāo)記DNA的驗(yàn)證　　7.3.1 放射自顯影技術(shù)　　7.3.2 非放射性檢測(cè)方法　7.4 重組DNA庫(kù)的篩選　　7.4.1 DNA庫(kù)板的制備　　7.4.2 膜的轉(zhuǎn)移　　7.4.3 膜的雜交　　7.4.4 膜的曝光　　7.4.5 克隆探測(cè)　　7.4.6 今后對(duì)庫(kù)的篩選　7.5 雙雜交系統(tǒng)8 DNA分析　8.1 測(cè)序　　8.1.1 放射性測(cè)序　　8.1.2 非放射性測(cè)序與自動(dòng)測(cè)序單位　　8.1.3 袖珍型測(cè)序　　8.1.4 焦磷酸測(cè)序法　　8.1.5 測(cè)序特性：八聚體　8.2 分析DNA突變的方法　　8.2.1 限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性　　8.2.2 單鏈構(gòu)象多態(tài)性　　8.2.3 變性梯度凝膠電泳　　8.2.4 時(shí)相溫度梯度電泳　　8.2.5 異源雙鏈核酸分析　　8.2.6 擴(kuò)增阻滯突變系統(tǒng)　　8.2.7 錯(cuò)配酶切　　8.2.8 截?cái)嗟鞍讬z測(cè)9 DNA序列功能的研究　9.1 組織內(nèi)轉(zhuǎn)錄研究　　9.1.1 核糖核酸酶保護(hù)實(shí)驗(yàn)　　9.1.2 實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn)　　9.1.3 原位雜交　　9.1.4 染色體熒光原位雜交　　9.1.5 原位聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)　　9.1.6 微陣列　9.2 突變　9.3 體外翻譯　9.4 表達(dá)系統(tǒng)　　9.4.1 細(xì)菌表達(dá)系統(tǒng)　　9.4.2 桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)　　9.4.3 其他表達(dá)系統(tǒng)　　9.4.4 哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的異源表達(dá)系統(tǒng)　　9.4.5 轉(zhuǎn)染方法　　9.4.6 多基因共轉(zhuǎn)染　　9.4.7 瞬時(shí)和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染　　9.4.8 報(bào)告基因　9.5 轉(zhuǎn)基因小鼠　　9.5.1 轉(zhuǎn)基因方法　9.6 轉(zhuǎn)基因表達(dá)調(diào)控　　9.6.1 四環(huán)素基因表達(dá)調(diào)控系統(tǒng)　　9.6.2 蛻皮素基因表達(dá)調(diào)控系統(tǒng)　9.7 基因治療　9.8 基因組學(xué)10 計(jì)算機(jī)應(yīng)用　10.1 重要事項(xiàng)　10.2 實(shí)踐中存在的問(wèn)題11 職業(yè)生涯規(guī)劃建議：針對(duì)青年研究者的馬基雅維利短期課程12 結(jié)束語(yǔ)附錄1圖標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液和細(xì)菌培養(yǎng)基　溶液　細(xì)菌培養(yǎng)基術(shù)語(yǔ)表附錄2供應(yīng)商推薦文獻(xiàn)休閑讀物索引

媒體關(guān)注與評(píng)論

　　導(dǎo)語(yǔ)　　這本實(shí)驗(yàn)室指南簡(jiǎn)單明快地介紹了分子生物學(xué)和基因組學(xué)中所涉及的各種現(xiàn)代方法和各種常規(guī)方法，并討論了每種方法的優(yōu)點(diǎn)和不足，舉例說(shuō)明了如何打開(kāi)實(shí)驗(yàn)的死結(jié)，講授了如何捕捉實(shí)驗(yàn)的時(shí)機(jī)，如何在適當(dāng)?shù)臅r(shí)間做實(shí)驗(yàn)從而大大提高實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。 本書(shū)作者M(jìn)ueIhardt為從核酸的結(jié)構(gòu)到核酸的轉(zhuǎn)譯、表達(dá)再到基因治療掃清了障礙！ 本書(shū)適合分子生物學(xué)和基因組學(xué)領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)室工作人員、科研工作者、教師和高年級(jí)本科生、研究生使用?！　∏把浴　≌媸橇钊穗y以置信，在短短的五年內(nèi)我們就準(zhǔn)備要發(fā)行本書(shū)的第四版了。在第四版中，我們?cè)俅螖U(kuò)充了內(nèi)容；然而即使專題的覆蓋面一直在增加，本書(shū)的主旨仍然保持著基本不變。例如，本次將微測(cè)序法、焦磷酸測(cè)序與RNA干擾包括了進(jìn)來(lái)。同時(shí)還著手編寫(xiě)了與年輕科研工作者職業(yè)生涯規(guī)劃相關(guān)的短篇——畢竟一個(gè)人不能僅依靠科研的神圣而生存。另外還循例做了大量小的修訂。盡管自發(fā)行以來(lái)已做了大量的工作，仍留有很大的改進(jìn)空間。你可以做任何可能之事，但最終都處在一種不確定性的掌控之中！本書(shū)難免會(huì)有一些印刷錯(cuò)誤，希望讀者不吝指正！　　書(shū)評(píng)　　這本實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)向我們舉例說(shuō)明了如何找開(kāi)實(shí)驗(yàn)的死結(jié)，講授了如何捕捉實(shí)驗(yàn)的時(shí)機(jī)，如何在適當(dāng)?shù)臅r(shí)間做實(shí)驗(yàn)從而大大提高準(zhǔn)確性?！　　鹗繉?shí)驗(yàn)室雜志　　用大量的實(shí)用小貼士來(lái)補(bǔ)充和完善基礎(chǔ)知識(shí)，本書(shū)的作者M(jìn)uelnardt為從酸核的結(jié)構(gòu)到核酸的轉(zhuǎn)譯、表達(dá)再到基因治療掃清了障礙?！　　獙?shí)驗(yàn)室雜志　　毫不驚奇，這本書(shū)會(huì)對(duì)銷售市場(chǎng)產(chǎn)生深遠(yuǎn)的影響。　　——食品與生物技術(shù)

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