分子生物學(xué)與基因組學(xué)

內(nèi)容概要

目前，實驗室人員面臨的一大困惑是如何運用正確的工具和方法來闡釋基因組所編碼的相關(guān)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，功能和表達解釋。德國馬爾堡大學(xué)的 Muelhardt所著的《分子生物學(xué)與基因組學(xué)》為大家提供了很多有益的實驗室小竅門和技巧，能夠大大提高實驗的成功率和準(zhǔn)確性。這本實驗室指南簡單明快地介紹了分子生物學(xué)和基因組學(xué)中所涉及的各種現(xiàn)代方法和各種常規(guī)方法，并討論了每種方法的優(yōu)點和不足。　　作為“實驗者”系列中的一本，本書秉承了叢書一貫的風(fēng)格，依然是一本非常實用的實驗室手冊，以簡捷明快的風(fēng)格，用100多個圖表，為廣大的分子生物學(xué)和基因組學(xué)實驗室工作人員提供了大量的實用小貼士來補充和完善基礎(chǔ)知識，從而大大提高實驗的準(zhǔn)確性和成功率?！　”緯m合分子生物學(xué)和基因組學(xué)領(lǐng)域的實驗室工作人員、科研工作者、教師和高年級本科生、研究生使用。

書籍目錄

引言第一版前言致謝1 什么是分子生物學(xué)？　1.1 分子生物學(xué)基礎(chǔ)知識：讓初學(xué)者認識分子世界　1.2 分子生物學(xué)基本要求　1.3 實驗室安全2 基本方法介紹　2.1 核酸的差異　2.2 核酸沉淀濃縮　　2.2.1 乙醇沉淀法　　2.2.2 濃縮裝置　　2.2.3 冷凍干燥　　2.2.4 鹽析　2.3 核酸純化　　2.3.1 酚氯仿抽提純化法　　2.3.2 聚乙二醇沉淀法　　2.3.3 蛋白結(jié)合濾膜純化法　　2.3.4 陰離子交換柱純化法　　2.3.5 玻璃乳純化法　　2.3.6 氯化銫密度梯度離心法　　2.3.7 透析法　2.4 核酸濃度測定　　2.4.1 分光光度計法　　2.4.2 瓊脂糖凝膠電泳法　　2.4.3 點量化法　　2.4.4 熒光定量法　　2.4.5 核酸檢測計法　　2.4.6 酶標(biāo)志法　2.5 DNA制備方法　　2.5.1 質(zhì)粒DNA的小量制備　　2.5.2 質(zhì)粒DNA的大量制備　　2.5.3 細菌培養(yǎng)基　　2.5.4 噬菌體DNA的制備　　2.5.5 利用輔助噬茵體制備單鏈DNA　　2.5.6 基因組DNA制備3 分子生物學(xué)工具　3.1 限制性酶　　3.1.1 命名法　　3.1.2 活性測定　　3.1.3 限制性酶切反應(yīng)　　3.1.4 限制性酶切難點　　3.1.5 限制性酶切指南　3.2 凝膠　　3.2.1 瓊脂糖凝膠　　3.2.2 瓊脂糖凝膠中的DNA片段回收　　3.2.3 聚丙烯酰胺凝膠　　3.2.4 聚丙烯酰胺凝膠中的DNA片段回收　　3.2.5 脈沖場凝膠電泳　　3.2.6 毛細管電泳　3.3 印跡法　　3.3.1 Sotlthern印跡法　　3.3.2 Northern印跡法　　3.3.3 點印跡法和縫印跡法4 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)　4.1 標(biāo)準(zhǔn)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)　4.2 改進的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)　　4.2.1 巢式聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)　　4.2.2 多重聚合酶鏈反應(yīng)　　4.2.3 長片段聚合酶鏈反應(yīng)　4.3 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的應(yīng)用　　4.3.1 反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)　　4.3.2 cDNA末端的快速擴增　　4.3.3 相同產(chǎn)物擴增　　4.3.4 經(jīng)典定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)　　4.3.5 實時定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)　　4.3.6 反向聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)　　4.3.7 Biotin—RAGE聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)　　4.3.8 改良引物誘變　　4.3.9 擴增阻滯突變系統(tǒng)　　4.3.10 原位聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)　　4.3.11 循環(huán)測序　　4.3.12 cDNA合成　　4.3.13 單細胞聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)5 RNA　5.1 RNA酶滅活　5.2 RNA提取方法　　5.2.1 一步法　　5.2.2 乙基苯基聚乙二醇裂解法　　5.2.3 基本信息　　5.2.4 RNA濃度測定　5.3 mRNA分離方法　　5.3.1 購買RNA　5.4 逆轉(zhuǎn)錄：cDNA合成　5.5 體外轉(zhuǎn)錄：RNA合成　5.6 RNA干擾6 克隆DNA片段　6.1 克隆的基本要素　　6.1.1 載體　　6.1.2 DNA片段　　6.1.3 補平反應(yīng)　　6.1.4 DNA定量　　6.1.5 連接　　6.1.6 克隆PCR產(chǎn)物　　6.1.7 用重組酶體系克隆　6.2 選擇克隆載體　　6.2.1 質(zhì)?！　?.2.2 噬菌體　　6.2.3 柯斯質(zhì)粒　　6.2.4 P1人工染色體及細菌人工染色體　　6.2.5 酵母人工染色體　6.3 選擇細菌　6.4 制備感受態(tài)細胞與轉(zhuǎn)化　　6.4.1 氯化鈣法　　6.4.2 氯化銣法　　6.4.3 TSS法　　6.4.4 電轉(zhuǎn)　　6.4.5 效價檢測　6.5 克隆的相關(guān)問題　6.6 克隆的保存7 雜交：如何檢測到DNA　7.1 制備探針　　7.1.1 制備標(biāo)記探針的方法　7.2 雜交　　7.2.1 雜交緩沖液　　7.2.2 雜交反應(yīng)體系　　7.2.3 雜交溫度　　7.2.4 洗滌　7.3 標(biāo)記DNA的驗證　　7.3.1 放射自顯影技術(shù)　　7.3.2 非放射性檢測方法　7.4 重組DNA庫的篩選　　7.4.1 DNA庫板的制備　　7.4.2 膜的轉(zhuǎn)移　　7.4.3 膜的雜交　　7.4.4 膜的曝光　　7.4.5 克隆探測　　7.4.6 今后對庫的篩選　7.5 雙雜交系統(tǒng)8 DNA分析　8.1 測序　　8.1.1 放射性測序　　8.1.2 非放射性測序與自動測序單位　　8.1.3 袖珍型測序　　8.1.4 焦磷酸測序法　　8.1.5 測序特性：八聚體　8.2 分析DNA突變的方法　　8.2.1 限制性片段長度多態(tài)性　　8.2.2 單鏈構(gòu)象多態(tài)性　　8.2.3 變性梯度凝膠電泳　　8.2.4 時相溫度梯度電泳　　8.2.5 異源雙鏈核酸分析　　8.2.6 擴增阻滯突變系統(tǒng)　　8.2.7 錯配酶切　　8.2.8 截斷蛋白檢測9 DNA序列功能的研究　9.1 組織內(nèi)轉(zhuǎn)錄研究　　9.1.1 核糖核酸酶保護實驗　　9.1.2 實時定量PCR實驗　　9.1.3 原位雜交　　9.1.4 染色體熒光原位雜交　　9.1.5 原位聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)　　9.1.6 微陣列　9.2 突變　9.3 體外翻譯　9.4 表達系統(tǒng)　　9.4.1 細菌表達系統(tǒng)　　9.4.2 桿狀病毒表達系統(tǒng)　　9.4.3 其他表達系統(tǒng)　　9.4.4 哺乳動物細胞中的異源表達系統(tǒng)　　9.4.5 轉(zhuǎn)染方法　　9.4.6 多基因共轉(zhuǎn)染　　9.4.7 瞬時和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染　　9.4.8 報告基因　9.5 轉(zhuǎn)基因小鼠　　9.5.1 轉(zhuǎn)基因方法　9.6 轉(zhuǎn)基因表達調(diào)控　　9.6.1 四環(huán)素基因表達調(diào)控系統(tǒng)　　9.6.2 蛻皮素基因表達調(diào)控系統(tǒng)　9.7 基因治療　9.8 基因組學(xué)10 計算機應(yīng)用　10.1 重要事項　10.2 實踐中存在的問題11 職業(yè)生涯規(guī)劃建議：針對青年研究者的馬基雅維利短期課程12 結(jié)束語附錄1圖標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液和細菌培養(yǎng)基　溶液　細菌培養(yǎng)基術(shù)語表附錄2供應(yīng)商推薦文獻休閑讀物索引

媒體關(guān)注與評論

　　導(dǎo)語　　這本實驗室指南簡單明快地介紹了分子生物學(xué)和基因組學(xué)中所涉及的各種現(xiàn)代方法和各種常規(guī)方法，并討論了每種方法的優(yōu)點和不足，舉例說明了如何打開實驗的死結(jié)，講授了如何捕捉實驗的時機，如何在適當(dāng)?shù)臅r間做實驗從而大大提高實驗的準(zhǔn)確性。 本書作者MueIhardt為從核酸的結(jié)構(gòu)到核酸的轉(zhuǎn)譯、表達再到基因治療掃清了障礙！ 本書適合分子生物學(xué)和基因組學(xué)領(lǐng)域的實驗室工作人員、科研工作者、教師和高年級本科生、研究生使用?！　∏把浴　≌媸橇钊穗y以置信，在短短的五年內(nèi)我們就準(zhǔn)備要發(fā)行本書的第四版了。在第四版中，我們再次擴充了內(nèi)容；然而即使專題的覆蓋面一直在增加，本書的主旨仍然保持著基本不變。例如，本次將微測序法、焦磷酸測序與RNA干擾包括了進來。同時還著手編寫了與年輕科研工作者職業(yè)生涯規(guī)劃相關(guān)的短篇——畢竟一個人不能僅依靠科研的神圣而生存。另外還循例做了大量小的修訂。盡管自發(fā)行以來已做了大量的工作，仍留有很大的改進空間。你可以做任何可能之事，但最終都處在一種不確定性的掌控之中！本書難免會有一些印刷錯誤，希望讀者不吝指正！　　書評　　這本實驗室手冊向我們舉例說明了如何找開實驗的死結(jié)，講授了如何捕捉實驗的時機，如何在適當(dāng)?shù)臅r間做實驗從而大大提高準(zhǔn)確性?！　　鹗繉嶒炇译s志　　用大量的實用小貼士來補充和完善基礎(chǔ)知識，本書的作者Muelnardt為從酸核的結(jié)構(gòu)到核酸的轉(zhuǎn)譯、表達再到基因治療掃清了障礙?！　　獙嶒炇译s志　　毫不驚奇，這本書會對銷售市場產(chǎn)生深遠的影響?！　　称放c生物技術(shù)

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