出版時間:2002-8 出版社:科學出版社 作者:J.薩姆布魯克 頁數(shù):1949 譯者:黃培堂
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前言
《分子克隆實驗指南》第一版寫于約20年前,當時分子克隆的基本方法遠未成熟,僅在少數(shù)幾個實驗室建立了起來?!斗肿涌寺嶒炛改稀返某霭娲蟠蟾淖兞诉@種局面,其指南性的特點使20世紀70年代后期和80年代早期對這些技術(shù)仍感到陌生的讀者獲得了信心。本書第二版于第一版出版后的第7年出版,通俗易懂,內(nèi)容更豐富。此時,個別方法日益通用和簡化,但是在多步驟的實驗環(huán)節(jié)中仍然難以把它們成功地串在一起。作為第二版的修訂本,第三版反映出的是一種成熟的操作規(guī)程,可靠性高,十分有利于科技人員的使用操作。在20世紀90年代,為滿足科技人員的要求許多枯燥且重復性強的分子生物學技術(shù)已經(jīng)實現(xiàn)自動化了。為滿足科技人員的要求,多步驟的實驗環(huán)節(jié)已被轉(zhuǎn)換成試劑盒?,F(xiàn)在很容易從商業(yè)制造商那里買到高質(zhì)量的基因組和cDNA文庫。而且包括核酸在內(nèi)的所有手工操作也極大地受益于試劑和酶的質(zhì)量的提高。伴隨著這些進步及其他方面的發(fā)展,合格的實驗室工作者現(xiàn)在能夠輕易避免許多實驗方面的問題,而這些問題在幾年前還曾困擾著最熟練的研究人員。并非表明每一細節(jié)都盡善盡美,也不是說技術(shù)不可能有進一步的發(fā)展了。然而,現(xiàn)在通過認真仔細地實驗設(shè)計并應(yīng)用已有知識,比反復試驗?zāi)軌蚋菀椎乇苊饫щy?! 斗肿涌寺嶒炛改稀匪邪姹镜闹饕康木褪墙o科研人員提供最新的重復性好的技術(shù)方法。前兩版的使用者將會發(fā)現(xiàn)本版實驗部分具有組織良好的特征。不僅如此。本版內(nèi)容更為全面而詳盡。老方法被現(xiàn)代化了,而新的方法也被增加進來,從而使分子克隆技術(shù)幾乎滲透到生物醫(yī)學研究的絕大多數(shù)領(lǐng)域。同樣重要的是我們希望提供合理的依據(jù),證明在可供選擇的程序中,特定方法為什么及如何起作用。因此這個版本不僅包含了對于實驗方法中要點的說明,還將豐富的材料以信息欄的形式列示出來,放在每章的末尾和附錄9中。我們希望貫穿在本書中的115個信息欄可以對為什么某些技術(shù)方法中要用某些方式,以及某些技術(shù)怎樣逐步發(fā)展等問題予以清晰的說明。最后,我們提供了豐富的參考文獻,以便感興趣的讀者可以對這些方法和觀點追根求源。很少有人會從頭到尾讀這本書,但我們希望對于分子克隆感興趣的人員將會從這些書頁中找到許多有助于他們思考和有助于他們手頭工作的內(nèi)容。
內(nèi)容概要
本書在第三版中,作者對圖書內(nèi)容進行了完全的升級,修訂了實驗的每條方案,增加了大量新的材料,拓寬了它涉及的領(lǐng)域,內(nèi)容豐富而詳細。使其具有用于學習遺傳學、分子細胞生物學、發(fā)育生物學、微生物學、神經(jīng)科學和免疫學等學科的重要指導和參考價值。 本書可供生物學、醫(yī)藥衛(wèi)生,以及農(nóng)、林、牧等方面有關(guān)的科研、教學與技術(shù)人員參考。
書籍目錄
中譯本序譯者的話 第三版前言 上冊 第1章 質(zhì)粒及其在分子克隆中的應(yīng)用 第2章 λ噬菌體及其載體 第3章 M13噬菌體載體 第4章 高容量載體的應(yīng)用 第5章 DNA凝膠電泳和脈沖場瓊脂糖凝膠電泳 第6章 真核基因組DNA的制備和分析 第7章 真核細胞mRNA的提取、純化和分析 第8章 聚合酶鏈式反應(yīng)體外擴增DNA 第9章 放射性標記DNA探針與RNA探針的制備 第10章 合成寡核苷酸探針 第11章 cDNA文庫制備及其基因鑒定 下冊 第12章 DNA測序 第13章 誘變 第14章 表達文庫的篩選 第15章 在大腸桿菌中表達克隆化基因 第16章 哺乳動物培養(yǎng)細胞中導入克隆化基因 第17章 哺乳動物培養(yǎng)細胞的基因表達分析 第18章 蛋白質(zhì)相互作用研究技術(shù)附錄 附錄1 分子克隆中使用的緩沖液和試劑的配制 附錄2 培養(yǎng)基 附錄3 載體和細菌菌株 附錄4 分子克隆所用的酶 附錄5 酶的抑制物 附錄6 核酸 附錄7 密碼子和氨基酸 附錄8 分子克隆中的常用技術(shù) 附錄9 檢測系統(tǒng) 附錄10 DNA陣列技術(shù) 附錄11 生物信息學 附錄12 告誡 附錄13 供應(yīng)商 附錄14 商標 索引 編輯致謝
章節(jié)摘錄
傳統(tǒng)的高拷貝數(shù)質(zhì)粒載體攜帶有各種colEl復制子;相反地,低拷貝數(shù)的質(zhì)粒載體帶有如R1之類的復制子,因而只能在非常嚴謹?shù)臈l件下維持質(zhì)粒I)NA的合成?! 〉谝淮牡涂截愝d體,按今天的標準而言可算是相當巨大而粗糙,它們曾被用來解決特定的外源基因和DNA序列克隆到質(zhì)粒中后出現(xiàn)的毒性問題。編碼膜蛋白和DNA結(jié)合蛋白的許多基因?qū)儆诖祟?,某些啟動子和調(diào)節(jié)序列也是如此(參見Fill et a1。1979;HIansen and vorl Meyenberg 1979;Little 1979;Murray and Kelley 1979;Beck andBremer 1980;Claverie。Martin et a1。1989)。有時這些I)NA序列和基因產(chǎn)物對宿主菌的毒性太大,以至于用高拷貝數(shù)的載體分離轉(zhuǎn)化的菌株簡直是不可能的。即使獲得了轉(zhuǎn)化子,它們的生長速率通常極低,克隆化的外源I)NA序列也不穩(wěn)定。為解決這類問題,已經(jīng)建立了多用途的低拷貝數(shù)載體,它們不僅帶有受到嚴格調(diào)控的原核啟動子,僅維持低水平本底表達(如pET系列載體),而且攜有防止外源DNA序列從上游質(zhì)粒啟動子過多轉(zhuǎn)錄的原核轉(zhuǎn)錄終止子?,F(xiàn)在這些低拷貝數(shù)的載體被添上了多克隆位點、單鏈噬菌體的復制起點、T3和T7的啟動子和其他有用的調(diào)節(jié)子?,F(xiàn)有的多數(shù)低拷貝數(shù)載體也攜帶par基因座,它在細胞分裂過程中促進質(zhì)粒分子在子細胞中的精確分配?! ?hellip;…
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《分子克隆實驗指南(上下)(第3版)》可供生物學、醫(yī)藥衛(wèi)生,以及農(nóng)、林、牧等方面有關(guān)的科研、教學與技術(shù)人員參考。
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